CA4P联合人参皂苷Rd治疗肝癌的药效机制研究及DNA荧光检测新方法的构建
发布时间：2021-01-09 01:59
本文第一部分实验探究了 Combretastatin A4phosphate（CA4P）与人参皂苷Rd联合用药对HepG2细胞及HepG2异种移植瘤的抑制作用和可能机制。CA4P是一种血管破坏剂,可导致肿瘤血管迅速关闭,进而造成肿瘤中心大面积坏死,从而引起肿瘤缺氧加剧和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的升高。人参皂苷Rd属于人参皂苷的二醇型,对多种肿瘤细胞具有显著的抗增殖作用。最近有文献报道,人参皂苷Rd可以下调HIF-1α的表达并抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而在体外和体内抑制MDA-MB-231细胞的生长。因此我们推测,CA4P和人参皂苷Rd的组合可能是一种抗肿瘤的可行思路。本部分实验采用MTT检测了 CA4P和人参皂苷Rd单独或联合使用时对HepG2细胞存活率的影响并分析了两药联合指数;采用TUNEL试剂盒分析了 CA4P和人参皂苷Rd单独或联合使用时对HepG2细胞凋亡的影响;在裸鼠体内建立HepG2异种移植肿瘤模型考察了 CA4P和人参皂苷Rd联合用药在体内的抗肿瘤作用;使用免疫组化检测了肿瘤组织内Ki67的表达情况,使用TUNEL法检测了肿瘤细胞凋亡情况,采用M...
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＣＡ４Ｐ的分子结构［３］??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ?Ａ４?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ．??
?第三章ＤＮＡ荧光检测新方法的构建???＾ＨＨｉ??ｒ＾ＢｃｙｒＭＭＵＨｍＰＴＴｎＴＴ＾?ｕ?＞?＊ｉ！??ｉｊｊｒ．ｒｖ．Ｈｉ－?？ＭＶｉｉｔｉ．ｉｔ?Ｔ．ｉｒ＾ｐ＾ｙｎ＾ｔ．．ＵＴ，｜ｉ＾＾Ｂ？？７ｒｆｎ＾＾＾Ｂ??ｐ？ｉ＿ｎｆｆｌＢＭｎｆｉｆｗＢ！ｎｉｍ＾ｉｉ７ｓ■■？＞ｗ３ｉ＿ｉｉ＾ｉｆＵＴ４—Ｅ５ｇｆＴｒ！ｇｓ５—??？ｗｉｉｉｇ？７ｇ？７５ｔＭｉ??图３－２?ｔＤＮＡ浓度为１?ｎＭ时硅片表面的ＳＥＭ图像??Ｆｉｇ．?３－２?ＳＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ｓｉｌｉｃｏｎ?ｓｕｒｆａｃｅｓ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔＤＮＡ?ｗａｓ?１?ｎＭ．??３．３．３实验条件优化??为了获得该方法的最佳分析性能，需要考察几个重要的实验条件。单链ＤＮＡ的浓度??需要通过测量荧光标记物的荧光强度来实现，标记时间越长，可以引入的荧光标记物越多，??所以该方法的分析性能受标记时间的影响较大。因此，我们首先考察了最佳荧光标记时间。??如图３－３Ａ所示，随着反应时间的增加，美光强度从１５?ｍｉｎ到９０?ｍｉｎ显著增强，而９０?ｍｉｎ??后没有观察到明显的荧光强度增加。这可能是由于９０ｍｉｎ后聚合物链的生长已经终止。因??此，在随后的实验中选择９０?ｍｉｎ作为最佳标记时间。??另一个必要的参数是分析性能中的ＦＯＡ浓度。因此，我们分析了?ＦＯＡ浓度对荧光强??度的影响。如图３－３Ｂ所示，随着ＦＯＡ浓度的增加，荧光强度显著增强，并在１５ｐＭ后趋??于稳定。因此，在以下实验中使用的ＦＯＡ的最佳浓度为１５?ｐＭ。??除了?ＦＯＡ标记时间及其浓度外，ＤＮＡ杂交时间也是影响分析能力的重要因素之一，??杂交时间的增加会
?南京中医药大学硕士学位论文???ｌ１２０＇?ｉ－?ｉ－?／??Ｉ■游?／?ｆ９０－?ｆ１６０＇?／??Ｊｖ?！：／?＂：／??６０－Ｉ?＾?。｜?丨?７〇Ｊ?°???１５?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?０?５?１０?１５?２０?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?１２０??ｒ？？ｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｏ?（ｍｉｎ）?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（＾Ｍ）?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｌｉｍ＊?（ｍｉｎ）??图３－３荧光标记时间（Ａ），荧光素邻丙烯酸浓度（Ｂ）和ＤＮＡ杂交时间（Ｃ）的影响??Ｆｉｇ．?３－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（Ａ），?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ?ｏ－ａｃｒｙｌａｔｅ??（Ｂ），?ａｎｄ?ｔｈｅ?ＤＮＡ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?（Ｃ）．??３．３．４分析性能研究??在最佳实验条件下，用０．１?的ｔＤＮＡ或ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ与发夹ＤＮＡ杂交，如图３－４Ａ??所示，可以观察到大量荧光斑点，而对照组几乎没有显示荧光斑点（图３－４Ｂ）。??Ｈ??图３－４浓度为０．１｜ｉＭ的ｔＤＮＡ（Ａ）和ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ（Ｂ）的表面荧光图像（放大倍率：１０ｘ２０，??曝光时间：４００?ｍｓ）??Ｆｉｇ．?３－４?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｍａｇｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｈｉｐ?ｓｕｒｆａｃｅ?ｔｏｗａｒｄ?０．１?｜．ｉＭ?ｔＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ??（Ｂ）．?（Ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：?１０ｘ２０，?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔｉｍｅ：?４００
本文编号：2965745
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＣＡ４Ｐ的分子结构［３］??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ?Ａ４?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ．??
?第三章ＤＮＡ荧光检测新方法的构建???＾ＨＨｉ??ｒ＾ＢｃｙｒＭＭＵＨｍＰＴＴｎＴＴ＾?ｕ?＞?＊ｉ！??ｉｊｊｒ．ｒｖ．Ｈｉ－?？ＭＶｉｉｔｉ．ｉｔ?Ｔ．ｉｒ＾ｐ＾ｙｎ＾ｔ．．ＵＴ，｜ｉ＾＾Ｂ？？７ｒｆｎ＾＾＾Ｂ??ｐ？ｉ＿ｎｆｆｌＢＭｎｆｉｆｗＢ！ｎｉｍ＾ｉｉ７ｓ■■？＞ｗ３ｉ＿ｉｉ＾ｉｆＵＴ４—Ｅ５ｇｆＴｒ！ｇｓ５—??？ｗｉｉｉｇ？７ｇ？７５ｔＭｉ??图３－２?ｔＤＮＡ浓度为１?ｎＭ时硅片表面的ＳＥＭ图像??Ｆｉｇ．?３－２?ＳＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ｓｉｌｉｃｏｎ?ｓｕｒｆａｃｅｓ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔＤＮＡ?ｗａｓ?１?ｎＭ．??３．３．３实验条件优化??为了获得该方法的最佳分析性能，需要考察几个重要的实验条件。单链ＤＮＡ的浓度??需要通过测量荧光标记物的荧光强度来实现，标记时间越长，可以引入的荧光标记物越多，??所以该方法的分析性能受标记时间的影响较大。因此，我们首先考察了最佳荧光标记时间。??如图３－３Ａ所示，随着反应时间的增加，美光强度从１５?ｍｉｎ到９０?ｍｉｎ显著增强，而９０?ｍｉｎ??后没有观察到明显的荧光强度增加。这可能是由于９０ｍｉｎ后聚合物链的生长已经终止。因??此，在随后的实验中选择９０?ｍｉｎ作为最佳标记时间。??另一个必要的参数是分析性能中的ＦＯＡ浓度。因此，我们分析了?ＦＯＡ浓度对荧光强??度的影响。如图３－３Ｂ所示，随着ＦＯＡ浓度的增加，荧光强度显著增强，并在１５ｐＭ后趋??于稳定。因此，在以下实验中使用的ＦＯＡ的最佳浓度为１５?ｐＭ。??除了?ＦＯＡ标记时间及其浓度外，ＤＮＡ杂交时间也是影响分析能力的重要因素之一，??杂交时间的增加会
?南京中医药大学硕士学位论文???ｌ１２０＇?ｉ－?ｉ－?／??Ｉ■游?／?ｆ９０－?ｆ１６０＇?／??Ｊｖ?！：／?＂：／??６０－Ｉ?＾?。｜?丨?７〇Ｊ?°???１５?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?０?５?１０?１５?２０?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?１２０??ｒ？？ｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｏ?（ｍｉｎ）?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（＾Ｍ）?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｌｉｍ＊?（ｍｉｎ）??图３－３荧光标记时间（Ａ），荧光素邻丙烯酸浓度（Ｂ）和ＤＮＡ杂交时间（Ｃ）的影响??Ｆｉｇ．?３－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（Ａ），?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ?ｏ－ａｃｒｙｌａｔｅ??（Ｂ），?ａｎｄ?ｔｈｅ?ＤＮＡ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?（Ｃ）．??３．３．４分析性能研究??在最佳实验条件下，用０．１?的ｔＤＮＡ或ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ与发夹ＤＮＡ杂交，如图３－４Ａ??所示，可以观察到大量荧光斑点，而对照组几乎没有显示荧光斑点（图３－４Ｂ）。??Ｈ??图３－４浓度为０．１｜ｉＭ的ｔＤＮＡ（Ａ）和ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ（Ｂ）的表面荧光图像（放大倍率：１０ｘ２０，??曝光时间：４００?ｍｓ）??Ｆｉｇ．?３－４?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｍａｇｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｈｉｐ?ｓｕｒｆａｃｅ?ｔｏｗａｒｄ?０．１?｜．ｉＭ?ｔＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ??（Ｂ）．?（Ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：?１０ｘ２０，?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔｉｍｅ：?４００
本文编号：2965745
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/2965745.html
最近更新
教材专著
