新型四氢狭花马钱碱类Topo Ⅰ抑制剂的设计、合成与初步活性评价及DIS/DIIS候选蛋白的表达与活性检测

发布时间：2021-01-09 08:05

　　拓扑异构酶I（Topol）抑制剂具有良好的抗癌活性,已有不少作为抗癌药物应用于临床治疗。但该类药物存在代谢快、副作用强等缺点,故寻找更高效低毒的药物十分重要。四氢狭花马钱碱（THA）是植物来源的生物碱,经验证有抗肿瘤活性。本论文第一部分模拟THA的生物合成途径,利用异胡豆苷合成酶（STR1）获得其前体物质,通过酶化学法合成一系列以THA结构为母核的化合物,并对其R、S构型进行初步活性评价,证实该类化合物是结构新颖的Topol抑制剂,且对HepG 2肿瘤细胞有杀伤作用。植物来源的Pictet-Spengler酶（P-S酶）是自然界中几千种生物碱合成的门控酶,其催化产物是多种药物的重要前体。目前为止共发现四种植物来源的P-S酶,其中 deacetylipecoside 合成酶（DIS）和 deacetylisoipecoside 合成酶（DIIS）的研究尚处于起步阶段,至今未明确这两个酶的DNA序列。论文第二部分对经转录组分析所得的7个DIS/DIIS候选DNA序列进行表达。经过Rosetta、GS115、M15三个表达系统的尝试,最终成功获得7个候选蛋白,并检测其催化活性。遗憾的是,经过... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：130 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
1 绪论
    1.1 拓扑异构酶Ⅰ抑制剂研究背景
        1.1.1 喜树碱类Topo Ⅰ抑制剂
        1.1.2 非喜树碱类Topo Ⅰ抑制剂
        1.1.3 小结与展望
    1.2 植物来源的Pictet-Spengler反应催化酶的研究
        1.2.1 Pictet-Spengler反应
        1.2.2 异胡豆苷合成酶
        1.2.3 去甲乌药碱合成酶
        1.2.4 Deacetylipecoside合成酶和deacetylisoipecoside合成酶
        1.2.5 小结与展望
2 新四氢狭花马钱碱Topo Ⅰ抑制剂的设计、合成与初步活性评价
    2.1 立项依据
    2.2 实验材料
        2.2.1 化学试剂
        2.2.2 生物试剂
        2.2.3 实验设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 THA类化合物的合成
        2.3.2 THA类化合物对Topo Ⅰ抑制作用的初步鉴定
        2.3.3 THA类化合物对HepG2肿瘤细胞抑制作用的初步鉴定
    2.4 实验结果
        2.4.1 化合物鉴定数据与图谱
        2.4.2 THA类化合物对Topo Ⅰ抑制作用的检测结果
        2.4.3 THA类化合物对HepG2抑制作用的检测结果
    2.5 讨论与小结
3 DIS/DIIS候选蛋白的表达与活性检测
    3.1 立项依据
    3.2 DIS/DIIS七个候选基因的克隆及Rosetta表达体系的构建
        3.2.1 实验背景
        3.2.2 实验材料
        3.2.3 实验方法
        3.2.4 实验结果
        3.2.5 结果讨论与小结
    3.3 DIS/DIIS三个候选基因的GS115表达体系的构建
        3.3.1 实验背景
        3.3.2 实验材料
        3.3.3 实验方法
        3.3.4 实验结果
        3.3.5 结果讨论与小结
    3.4 DIS/DIIS 一个候选基因的M15表达体系的构建
        3.4.1 实验背景
        3.4.2 实验材料
        3.4.3 实验方法
        3.4.4 实验结果
        3.4.5 结果讨论与小结
    3.5 标准产物合成与酶活测定
        3.5.1 实验背景
        3.5.2 实验材料
        3.5.3 实验方法
        3.5.4 实验结果
        3.5.5 结果讨论与小结
    3.6 讨论与小结
参考文献
附录
作者简历



本文编号：2966279