人凝血/抗凝血因子类产品蛋白含量快速检测方法的建立及验证

发布时间：2021-01-15 09:30

　　目的建立人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量Lowry快速检测法,并进行验证。方法采用《中国药典》三部（2010版）Lowry法检测因子类产品的蛋白含量,通过耐用性研究降低辅料对方法的干扰,优化Lowry检测方法,并对方法的专属性、线性及范围、准确度、精密度进行验证。结果不同辅料对Lowry法的干扰程度不同,人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ样品分别稀释20、10、80、160倍,可明显降低辅料的影响;Lowry法与凯氏定氮法相关性良好,方法线性R>0.99,其准确度、精密度均良好。结论 Lowry法测定人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量操作简便、快速、准确,可用于产品的质量控制。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2016,29(04)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

Lowry法的标准曲线

SD（%）2.64.1FⅡa-15.255.11>0.055.175.085.145.08RSD（%）1.10.4ATⅢ-18.438.15>0.058.248.178.398.22RSD（%）1.20.52.3方法的线性及范围标准曲线见图1，回归方程为y=359.1x+0.6234，R>0.99；检测不同浓度标准蛋白质的回收率在90%~110%之间，供试品溶液的测定范围为7.932~79.32μg／ml，见表3。表3Lowry法的标准曲线范围Tab3.RangeofstandardcurveofLowrymethod体积蛋白浓度测定的蛋白浓度回收率（ml）（μg／ml）（μg／ml）（%）SM10.17.937.9299.8SM20.539.6639.4699.5SM31.079.3279.1599.8图1Lowry法的标准曲线Fig1.StandardcurveofLowrymethod2.4方法的准确度每个样品3次测定值的RSD均＜10%，蛋白回收率在90%~110%之间，见表4。表明该方法准确度良好。表4Lowry法的准确度验证结果Tab4.VerificationforaccuracyofLowrymethod样品添加蛋白含量（μg／ml）回收率（%）FⅧ-139.059840.8410336.8993RSD（%）5.1-FⅨ-143.3610941.5610539.0598RSD（%）5.3-FⅡa-137.979638.699838.3397RSD（%）1.0-ATⅢ-140.1210141.9210637.6195RSD（%）5.5-0.000.050.100.150.200.250908070605040302010吸光度蛋白浓度（μg／m）l样品·431·

【参考文献】：
期刊论文
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[3]中国市场人凝血因子Ⅷ质量分析[J]. 张学俊,叶生亮,杜晞,谢亦武,曹海军,王宗奎,李长清.  中国输血杂志. 2012(10)
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本文编号：2978666