氟西汀联合拉莫三嗪抗小鼠强迫应激及慢性应激诱导的抑郁样作用研究

发布时间：2017-04-11 10:01

  本文关键词：氟西汀联合拉莫三嗪抗小鼠强迫应激及慢性应激诱导的抑郁样作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究氟西汀联合拉莫三嗪对强迫应激及慢性不可预知性应激抑郁模型中小鼠的抗抑郁样作用及其可能的作用机制。方法：(1)小鼠强迫应激模型：小鼠根据预实验剔除不动时间差异较大的,其余小鼠均衡随机分为：溶剂对照组、氟西汀阳性药对照组(10 mg/kg).氟西汀(10 mg/ kg)和拉莫三嗪(10 mg/kg)联合用药组。其中溶剂对照组每日灌胃等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余两组按设计好的剂量灌胃氟西汀和拉莫三嗪,均连续灌胃7天。采用小鼠悬尾实验和强迫游泳实验中小鼠不动时间以及旷场实验中小鼠直立次数、穿越底面块数和中央格停留时间作为初次筛选抗抑郁药的指标,对氟西汀和拉莫三嗪联合用药的抗抑郁作用进行初步评价。(2)小鼠慢性应激模型：小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、氟西汀组(10 mg/kg)、氟西汀(10 mg/kg)和拉莫三嗪(10 mg/kg)联合用药小剂量组、氟西汀(10 mg/ kg)和拉莫三嗪(20 mg/kg)联合用药大剂量组。除正常对照组外,其余4组小鼠经历4周慢性不可预知性温和应激。应用随机方法将11种刺激因子随机分配到每周7天从而建立慢性不可预知性温和应激模型(Chronic unpredicted mild stress,CUMS)。小鼠造模1周后开始灌胃,其中正常对照组不给予任何药物,模型对照组每天灌胃等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其他各组按预实验计划量灌服氟西汀和拉莫三嗪,均连续给药3周。于实验前1天(0 day,0d)、实验第7、14、21、28天分别测量小鼠体重并记录,同时进行肛温检测和蔗糖水消耗实验。造模结束后,小鼠迅速脱颈椎处死并取脑组织制备相应浓度的组织匀浆液以备含量测定。(3)小鼠脑组织单胺类递质及抗氧化指标检测：通过抑制单胺递质去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)重摄取实验和酶联免疫吸附测定方法(enzyme-linked immu-neosorbent assay, ELISA)检测小鼠脑组织中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量,研究其抗抑郁中对单胺递质部分的作用机制。采用分光光度法分别检测小鼠脑组织中抗氧化系统超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondi-aldehyde, MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的含量,研究其抗抑郁中对抗氧化系统部分的作用机制。结果：(1)小鼠悬尾实验中,与溶剂对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)及联合用药组小鼠悬尾不动时间均显著缩短(P0.05,P0.01)。小鼠强迫游泳实验中,与溶剂对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)和联合用药组小鼠强迫游泳不动时间均显著缩短(P0.05,P0.05)。小鼠旷场实验中,与溶剂对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)和联合用药组在小鼠水平活动、直立行为和中央格停留时间上均无显著性差异(P0.05)。(2) CUMS模型小鼠的体重在造模前1天,各组小鼠的体重基本一致,无显著性差异(P0.05),具有可比性；造模第7天(给药前一天),与正常对照组比较,模型对照组、氟西汀组(10 mg/kg).联合用药小剂量和大剂量组小鼠体重均显著降低(P0.01, P0.01, P0.01, P0.01);造模第14天,与正常对照组比较,模型对照组、氟西汀组(10 mg/kg),联合用药各剂量组小鼠体重降低均显著(P0.01, P0.01, P0.01, P0. 01);造模第21天,与正常对照组比较,模型对照组、氟西汀组(10 mg/kg)、联合用药各剂量组小鼠体重降低均显著(P0.01,P0.01,P0.01,P0.01);在造模第28天,相比正常对照组,模型对照组、氟西汀组(10 mg/kg)、联合用药小剂量组小鼠体重均降低显著(P0.01,P0.01,P0.01),其中与模型对照组比较,联合用药大剂量组小鼠体重显著升高(P0.05)。CUMS模型肛温检测中,在造模前1天,各组小鼠的肛温基本一致,无显著性差异(P0.05),具有可比性；造模第7天,各组小鼠的肛温也无显著性差异(P0.05)；造模第14天,与正常对照组比较,模型对照组小鼠肛温略有下降,与模型对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)和联合用药组小鼠肛温略有升高,但均无显著性差异(P0.05)；造模第21天,与正常对照组比较,模型对照组小鼠肛温显著降低(P0.01),与模型对照组比较,联合用药小剂量和大剂量组小鼠肛温均有显著性升高(P0.01,P0.01)；造模第28天,与正常对照组比较,模型对照组小鼠肛温显著性降低(P0.01),与模型对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)小鼠肛温升高显著(P0.05),联合用药各剂量组小鼠肛温升高均具有显著性统计学意义(P0.01,P0.01)。CUMS模型蔗糖水消耗实验中,造模第21天,与正常对照组比较,模型对照组小鼠的绝对蔗糖饮水量、相对蔗糖饮水量以及糖水偏爱百分比均明显降低,但均无显著性差异(P0.05),与模型对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)和联合用药小剂量和大剂量组的绝对蔗糖饮水量和相对蔗糖饮水量均有升高,但均无显著性差异(P0.05),其中联合用药小剂量组小鼠的糖水偏爱百分比升高显著(P0.05)；造模第28天,相比正常对照组,模型对照组小鼠绝对蔗糖饮水量降低显著(P0.01)、相对蔗糖饮水量显著降低(P0.05),造模各组小鼠糖水偏爱百分比均有下降,其中模型对照组小鼠糖水偏爱百分比降低显著(P0.01)；与模型对照组相比,氟西汀组(10 mg/kg)、联合用药小剂量和大剂量组小鼠绝对蔗糖饮水量均有升高且均具有显著性统计学意义(P0.01,P0.01,P0.01),氟西汀组(10 mg/kg)、联合用药小剂量和大剂量组小鼠相对蔗糖饮水量显著升高(P0.05,P0.05,P0.01),氟西汀组(10 mg/kg)、联合用药小剂量和大剂量组小鼠糖水偏爱百分比升高均显著(P0.01,P0.01,P0.01)。(3)小鼠抑制单胺递质去甲肾上腺素(NE)重摄取实验中,与溶剂对照组比较,氟西汀组(10 mg/kg)的小鼠死亡率略有升高,但无显著性差异(P0.05),而联合用药组小鼠死亡率升高具有显著性差异(P0.05)。小鼠脑组织中单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)含量检测结果表明,与正常对照组比较,造模各组小鼠脑中5-羟色胺(5-HT)含量均有下降,其中模型对照组、氟西汀组和联合用药小剂量组小鼠脑中5-羟色胺(5-HT)的含量降低显著(P0.01,P0.01,P0.01)；与模型对照组比较,氟西汀组和联合用药小剂量和大剂量组小鼠脑内5-羟色胺(5-HT)含量均显著升高(P0.05,P0.05,P0.01)。在小鼠脑组织抗氧化系统部分主要进行了小鼠脑组织蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)四项含量检测。结果显示,相比于正常对照组,模型对照组小鼠脑内SOD活力显著降低(P0.05),MDA含量升高显著(P0.05), GSH含量显著降低(P0.05)；与模型对照组对比,联合用药大剂量组小鼠脑内SOD活力升高非常明显,其差异有显著统计学意义(P0.01),联合用药大剂量组小鼠脑内MDA含量显著降低(P0.05),联合用药小剂量和大剂量组小鼠脑组织中谷胱甘肽(GSH)含量升高均非常明显,其差异均有显著统计学意义(P0.01,P0.01)。结论：氟西汀联合拉莫三嗪可显著改善小鼠的抑郁样行为,其抗抑郁的作用机制可能与上调脑组织中单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)的含量以及改善脑组织氧化应激系统的平衡失调有关。
【关键词】：氟西汀 拉莫三嗪 联合用药 抑郁 小鼠
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 缩略语表13-18
• 引言18-20
• 第一章 氟西汀联合拉莫三嗪对小鼠强迫应激的作用20-23
• 1 材料20-21
• 1.1 实验动物20
• 1.2 实验药物与试剂20
• 1.3 实验仪器20-21
• 2 实验方法21-22
• 2.1 悬尾实验21
• 2.2 强迫游泳实验21
• 2.3 旷场实验21-22
• 3 统计学处理22
• 4 结果22-23
• 4.1 氟西汀联合拉莫三嗪对小鼠悬尾不动时间的影响22
• 4.2 氟西汀联合拉莫三嗪对小鼠强迫游泳不动时间的影响22-23
• 4.3 氟西汀联合拉莫三嗪对小鼠旷场实验的影响23
• 第二章 氟西汀联合拉莫三嗪对慢性应激诱导的抑郁模型小鼠行为学的影响23-31
• 1 材料23-24
• 1.1 实验动物23-24
• 1.2 实验药物与试剂24
• 1.3 实验仪器24
• 2 实验方法24-27
• 2.1 慢性应激诱导的抑郁模型的制备24-27
• 2.1.1 CUMS模型的建立方法及小鼠分组24-26
• 2.1.2 小鼠给药计划26-27
• 2.2 CUMS模型评价指标的测定与记录27
• 2.2.1 体重的测量27
• 2.2.2 肛温的测量27
• 2.2.3 蔗糖水消耗实验27
• 3 统计学处理27-28
• 4 结果28-31
• 4.1 氟西汀和拉莫三嗪联合用药对CUMS模型小鼠体重的影响28
• 4.2 氟西汀和拉莫三嗪联合用药对CUMS模型小鼠肛温的影响28-29
• 4.3 氟西汀和拉莫三嗪联合用药对CUMS模型小鼠蔗糖水消耗实验的影响29-31
• 4.3.1 联合用药对CUMS模型小鼠绝对蔗糖饮水量的影响29-30
• 4.3.2 联合用药对CUMS模型小鼠相对蔗糖饮水量的影响30
• 4.3.3 联合用药对CUMS模型小鼠糖水偏爱百分比的影响30-31
• 第三章 氟西汀和拉莫三嗪联合用药抗抑郁作用的机制探讨31-45
• 第一节 联合用药对小鼠抑制去甲肾上腺素(NE)重摄取实验的影响31-32
• 1 材料31-32
• 1.1 实验动物31
• 1.2 实验药物及试剂31
• 1.3 实验仪器31-32
• 2 实验方法32
• 3 统计学处理32
• 4 联合用药对小鼠去甲肾上腺素(NE)重摄取实验的影响结果32
• 第二节 联合用药对小鼠脑组织中单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)的影响32-35
• 1 标本的采集32
• 2 实验试剂32-33
• 3 实验仪器33
• 4 小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)含量的检测33-34
• 4.1 检测原理33
• 4.2 操作步骤33-34
• 5 统计学处理34
• 6 结果34-35
• 6.1 5-羟色胺(5-HT)的标准回归曲线以及回归方程34
• 6.2 联合用药对小鼠脑组织中神经递质5-羟色胺(5-HT)的含量影响结果34-35
• 第三节 联合用药对小鼠脑组织中抗氧化系统的影响35-45
• 1 小鼠脑组织的蛋白含量的测定35-36
• 1.1 标本的采集35
• 1.2 实验试剂35
• 1.3 实验仪器35-36
• 1.4 小鼠脑组织蛋白含量的检测36
• 1.4.1 测定原理36
• 1.4.2 操作步骤36
• 1.4.3 含量计算36
• 2 联合用药对小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响36-39
• 2.1 标本的采集36-37
• 2.2 实验试剂37
• 2.3 实验仪器37
• 2.4 小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定37-38
• 2.4.1 测定原理37
• 2.4.2 操作步骤37-38
• 2.4.3 计算公式38
• 2.5 统计学处理38
• 2.6 联合用药对小鼠脑组织中超氧化物岐化酶(SOD)活力的影响结果38-39
• 3 联合用药对小鼠脑组织中丙二醛(MDA)含量的影响39-41
• 3.1 标本的采集39
• 3.2 实验试剂39
• 3.3 实验仪器39-40
• 3.4 小鼠脑组织中丙二醛(MDA)的含量测定40-41
• 3.4.1 测定原理40
• 3.4.2 操作步骤40
• 3.4.3 计算公式40-41
• 3.5 统计学处理41
• 3.6 联合用药对小鼠脑组织中丙二醛(MDA)含量的影响结果41
• 4 联合用药对小鼠脑组织中谷胱甘肽(GSH)含量的影响41-45
• 4.1 标本的采集41
• 4.2 实验试剂41-42
• 4.3 实验仪器42
• 4.4 小鼠脑组织中谷胱甘肽(GSH)的含量测定42-43
• 4.4.1 测定原理42
• 4.4.2 操作步骤42-43
• 4.4.3 计算公式43
• 4.5 统计学处理43
• 4.6 联合用药对小鼠脑组织中谷胱甘肽(GSH)含量的影响结果43-45
• 讨论45-49
• 小结49
• 结论49-50
• 参考文献50-53
• 综述53-59
• 参考文献57-59
• 致谢59

【参考文献】

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