aFGF对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞凋亡的影响

发布时间：2017-04-14 04:19

  本文关键词：aFGF对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞凋亡的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过建立海马星形胶质细胞(AS)的体外培养模型,从细胞凋亡的模块探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)诱导的海马星形胶质细胞损伤的保护作用。方法：SD乳鼠的海马组织经体外分离和纯化培养,取传至第三代的星形胶质细胞进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法进行细胞鉴定,获得纯度大于95%的星形胶质细胞用于后续实验。将细胞接种于24孔板内：实验随机分为3组：①对照组：正常培养；②GM组：2 g/LGM作用细胞24h；③aFGF+GM组：加入4.25μg/L aFGF作用细胞24h后再加2 g/L GM培养24h。各组分别设6个复孔,实验重复3次。24h后通过应用TUNEL结合DAPI核染色法和Annexin V-FITC/PI双染法反映细胞凋亡的表达状况。结果：(1)形态学观察：对照组在光镜下可见细胞轮廓清晰,折光性强,细胞胞体发出较多长而分支的突起,呈现出形态多样的梭形、多边形交织排列的成网状结构；GM组在光镜下可见星形胶质细胞的形态学结构发生改变,部分细胞出现皱缩成团,胞体分支的突起连接中断甚至出现细胞脱落的现象,丧失了细胞的完整性结构,细胞质内有较多的颗粒和空泡存在；aFGF+GM组在光镜下可见细胞突起回缩减弱,皱缩程度减轻,胞体形态结构也见不同程度的缓解,细胞聚集成团和细胞脱落现象减少,细胞轮廓较清晰,突起连接中断少见且细胞质内颗粒和空泡减少。(2)2g/L GM作用细胞24h能抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,同时给予4.25μg/L aFGF处理,星形胶质细胞凋亡率下降,其中损伤组采用TUNEL染色阳性的细胞数较正常对照组显著升高(P0.01)；保护组用TUNEL染色阳性的细胞数较损伤组显著降低(P0.01)；但是,保护组与正常组之间不具差异性(P0.05)；而通过Annexin V-FITC/PI双染法可见：正常对照组细胞的总凋亡率为8.37%,损伤组细胞的总凋亡率28.66%,保护组细胞的总凋亡率为25.55%。其中,保护组细胞的早期凋亡率与损伤组细胞的早期凋亡率相比未见区别,而其晚期凋亡率与损伤组相比有所降低,提示aFGF可能阻碍GM所致星形胶质细胞早期凋亡的进一步发展。结论：(1)采用“胰蛋白酶消化组织块分离+传代纯化培养法”对体外培养大鼠AS进行优化,成功获取高纯度的星形胶质细胞。(2) aFGF具有减轻庆大霉素所致星形胶质细胞凋亡的作用,且提示可能体现在阻碍细胞早期凋亡的进一步发展。(3) aFGF对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞损伤具有一定的保护作用。
【关键词】：酸性成纤维细胞生长因子 庆大霉素 海马星形胶质细胞 凋亡 细胞培养
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-31
• 1 实验材料13-22
• 2 实验方法22-31
• 结果31-40
• 1 海马星形胶质细胞生长状况31-32
• 2 加药处理24h后细胞的形态学变化32-34
• 3 星形胶质细胞调亡的检测34-40
• 讨论40-48
• 1 原代星形胶质细胞的分离及纯化培养的改进41-45
• 2 原代星形胶质细胞损伤模型的建立45
• 3 星形胶质细胞损伤保伊作用的调亡检测45-47
• 4 对今后实验研究工作的展望47-48
• 小结48-49
• 参考文献49-53
• 英文缩略词索引53-55
• 综述55-70
• 参考文献67-70
• 致谢70-72
• 硕士研究生期间发表的学术论文72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李春鹏;张晔;夏春林;沈慧;张静;陆志方;;巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达[J];解剖学报;2007年02期

2 周曼;杨万超;刘翔;于淼;李文志;;大鼠脑星形胶质细胞体外培养方法的改进及鉴定[J];哈尔滨医科大学学报;2014年02期

3 文灿;李淑蓉;苏炳银;;离体脊髓星形胶质细胞的纯化与鉴定[J];局解手术学杂志;2008年01期

4 刘r

本文编号：305214