重组人肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗外源DNA残留量检测方法的建立

发布时间：2021-03-02 19:57

　　目的建立重组人肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000～5 000 bp和100～1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A₂₆₀/A₂₈₀值为1. 86,可作为阳性对照。以100～1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg～10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(03)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

昆虫细胞基因组DNA分子筛柱层析图谱和琼脂糖凝胶电泳图

以未纯化的基因组DNA作为阳性对照和探针标记模板，杂交反应的显色深度低，梯度不明显，最低仅能检测到500 pg的阳性对照品；以纯化的基因组DNA作为阳性对照和探针标记模板，杂交反应的显色清晰，梯度明显，最低可检测到10 pg的阳性对照品，检测灵敏度较高。见图2。因此，选择经纯化获得的高纯度基因组DNA样品作为最佳阳性对照品和探针模板进行后续试验。2.3 DNA超声随机片段大小对杂交反应的影响

以1 000～5 000 bp的基因组DNA随机片段作为模板标记的探针，杂交显色相对较浅，100 pg～1 ng范围内梯度不明显，检测灵敏度为100 pg；而以100～1 000 bp的基因组DNA随机片段作为模板标记的探针，显色较清晰，梯度明显，检测灵敏度达1 pg，表明该探针的标记效率更高，杂交反应更为灵敏。见图3。2.4 检测范围、灵敏度及特异性

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3059855