雷珠单抗的大肠埃希菌胞外分泌表达、纯化及结构表征

发布时间：2021-03-03 11:22

　　抗血管内皮细胞生长因子（VEGF）抗体可抑制新生血管的形成和生长,在年龄相关性黄斑变性眼科疾病的临床治疗中具有重要应用价值,特别是已上市的商品名为雷珠单抗的VEGF抗体Fab片段,在市场上取得巨大成功。本研究探索了雷珠单抗在大肠埃希菌中的胞外分泌表达技术,所表达的产品利用SDS-PAGE、Western Blot、肽谱图全序列分析和纳米差示扫描量热法（Nano DSC）等手段进行了初步的结构表征。结果显示,本研究成功实现了雷珠单抗的大肠埃希菌胞外分泌表达,经过进一步的Capto L亲和色谱获得了有正确氨基酸序列的Fab产品,经质谱分析具有正确的二硫键配对,且具有与标准品相似的热稳定性,为其进一步的工业生产奠定了基础。 

【文章来源】：中国医药工业杂志. 2020,51(02)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

A：诱导条件为16℃、转速180r/min的表达结果，B：诱导条件为20℃、转速200r/min的表达结果，C：不同组分中目的蛋白的分布(WesternBlot)，D：不同组分中目的蛋白的分布

?票?雷珠单抗具有正确的二级结构。2.6雷珠单抗的热稳定性分析取浓度为1mg/ml的纯化样品或雷珠单抗标准品200μl，加入到纳米差示扫描量热仪(nanodifferentialscanningcalorimetry，NanoDSC)自带的微量毛细管中。同法取PBS作为空白对照，设置温度梯度为10～95℃，升温速度为1℃/min。根据<4040~5050~8080~200≥200180160240320400ABQuery140120100806040200-20500-50-100-150-200ExoTm=74.55℃Tm=74.02℃图5融化焓变/kJ.mo-l1融化焓变/kJ.mo-l1100A：所有肽段与理论序列的比对结果，B：二级质谱覆盖度及二硫键配对分析图5雷珠单抗肽谱覆盖率Fig.5MassPeptideMappingCoverageofRanibizumab

融化

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗VEGF抗体Fab片段在大肠埃希菌中的可溶性表达策略[J]. 郎晓薇,李亮助,丁凯,陈俊升,朱建伟.  中国医药工业杂志. 2017(11)
[2]抗VEGF单克隆抗体Fab片段在E.coli中的分泌表达[J]. 王志龙,王英明,刘峥兆,卢大儒,朱化星.  中国生物工程杂志. 2014(07)
[3]原核系统可溶性表达策略[J]. 刘爽,胡宝成.  生物技术通讯. 2005(02)

博士论文
[1]活性多肽的分泌表达研究[D]. 闻崇炜.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2003



本文编号：3061176