抗菌肽Dermaseptin B2、改造肽表达体系的构建和抗菌活性比较研究

发布时间：2021-03-18 09:12

　　目的:天然抗菌肽Dermaseptin B2除了有广谱的抗菌活性,还具有抗肿瘤活性、溶血活性低的优势,且对部分动物细胞没有毒性,因而有很好的研究前景和意义。已有研究表明Dermaseptin B2的抗菌活性取决于N端、C端螺旋非极性面疏水残基的数量及其侧链大小。本研究通过用亮氨酸替换N端、C端的丝氨酸的方式改造Dermaseptin B2,经生物信息学手段分析后,构建Dermaseptin B2及改造肽Dermaseptin B2^m的原核表达体系,并做初步的抗菌活性比较研究。方法和结果:1.天然抗菌肽的改造已有研究表明,Dermaseptin B2通过增加N端、C端的疏水残基的数量,或者选用侧链大的疏水残基替换侧链小的疏水残基能够提高其抗菌活性。本研究的改造方案是,一是用亮氨酸替换Dermaseptin B2 N端、C端的丝氨酸,利用生物信息学手段分析表明,其疏水性有所提高。二是从NCBI Gene bank中获得的Dermaseptin B2的mRNA序列转换成cDNA序列,在其5’端添加肠激酶切割位点（5’-GACGACGACGACAAG-3’）,以便后续蛋白... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pET-32a(+)质粒

抗菌肽 Dermaseptin B2、改造学硕士学位论文 的构建和抗菌活性比为 50：1 配制而成，充分混匀，室温 24 h 内稳定。稀释标准品：96 孔板中第一孔加 40 μl PBS，后面 2-7 孔每孔加孔中加入 10 μl BSA 标准品使其终浓度为 1000 μg/mL，取 25 均匀，依次类推，至第六孔混合均匀后取 25 μl 弃掉。1-7 中 B 1000、500、250、125、62.5、31.25、0 μg/mL。取样品 25 μl 到 96 孔板中。各孔加 200 μl BCA 工作液，37℃放置 30 min。用酶标仪测定曲线计算出蛋白浓度。

图 3.2 DRS B2 基因合成结果 图 3.3 DRS B2m基因合成结果（图 3.2，M:DNAmarker；1-10： DRS B2 基因 PCR 产物）（图 3.3，M:DNAmarker；1-10：DRS B2m基因 PCR 产物）3.3 表达载体构建结果3.3.1 目的基因、表达载体双酶切及连接结果为了后续构建表达载体，在设计目的基因时引入 EcoRⅠ和 KpnⅠ酶切位点，目的基因经双酶切制备表达载体连接小片段（129 bp），通过 2%琼脂糖凝胶电泳对酶切片段进行鉴定，在凝胶成像系统下观察结果，在 100-150 bp 之间有一明显的条带（见图 3.4，3.5），说明目的基因双酶切消化成功，可用于下一步连接反应。

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗菌肽改良设计及抗炎作用的研究进展[J]. 杨静,贾如涵,李文慧,石大林,邵明洋,韩跃武.  中国生物工程杂志. 2018(01)
[2]重组人骨形态发生蛋白-7表达系统研究进展[J]. 安新玲,韩金祥,王世立.  生物技术通讯. 2009(06)
[3]抗菌肽CM4组分对寄生曲霉抗性机制的研究[J]. 徐进署,张双全.  自然科学进展. 2001(12)



本文编号：3088090