叶酸—壳聚糖修饰纳米硒的制备及其评价
发布时间：2021-03-24 19:37
硒（Se）是人体所必需的一种微量元素,具有抑菌、抗癌、抗氧化等多种生物活性。纳米硒（SeNPs）不仅具有较高的生物活性和较低的毒性,而且与抗癌药物具有较好的协同抗癌效果,因而受到广泛的关注。然而,纳米硒仍然存在着一些缺点,例如稳定性较差、缺乏对癌细胞的选择性等,这些缺点限制了它在抗癌方面的应用。围绕以上问题,本研究主要做了以下工作:（1）使用具有癌细胞靶向作用的叶酸（FA）作为配体,对壳聚糖（CS）进行修饰,并对反应条件进行优化以提高叶酸与壳聚糖的结合率。叶酸-壳聚糖结合物（FA-CS）通过薄层色谱（TLC）,红外光谱（FT-IR）及核磁共振氢谱（1H-NMR）进行表征。并通过单因素考察和正交试验,对反应条件进行优化,以提高叶酸与壳聚糖的结合率。实验结果显示,叶酸成功地对壳聚糖进行了修饰,且最优的反应条件为:反应温度50℃,反应时间24h,叶酸与壳聚糖投料比2:1（w/w）,通过最优反应条件所得产物的平均结合率为17.58%。（2）制备叶酸-壳聚糖修饰的纳米硒（FA-CS-SeNPs）,并对其平均粒径、粒径分布、Zeta电位、形态特征及物理稳定性进行评价。使用动态...
【文章来源】：青岛科技大学山东省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
符号说明
前言
第一章 绪论
1.1 硒的性质
1.1.1 硒的种类
1.1.2 硒的生物活性
1.1.3 硒的毒性
1.2 纳米硒的毒性及影响因素
1.2.1 纳米硒的毒性
1.2.2 影响纳米硒毒性的因素
1.2.2.1 剂量的影响
1.2.2.2 形态的影响
1.2.2.3 粒径的影响
1.2.2.4 电荷的影响
1.3 纳米硒的制备方法
1.3.1 化学法制备纳米硒
1.3.2 物理法制备纳米硒
1.3.3 生物法制备纳米硒
1.4 纳米硒的应用
1.4.1 抗癌活性
1.4.2 抑菌活性
1.4.3 抗炎及抗氧化
1.4.4 其他应用
1.5 纳米硒的修饰
1.5.1 多糖的修饰
1.5.2 电荷的修饰
1.5.3 靶向性配体的修饰
1.6 壳聚糖及其衍生物
1.6.1 壳聚糖及其衍生物的性质
1.6.2 壳聚糖及其衍生物在药物传递系统中的应用
1.6.3 壳聚糖及其衍生物在纳米硒制备中的应用
1.7 叶酸在靶向给药系统中的应用
1.7.1 叶酸与叶酸受体
1.7.2 叶酸在靶向给药系统中的应用
1.8 联合纳米硒给药的药物传递系统
1.9 本课题的研究目的及意义
第二章 壳聚糖的叶酸修饰及其表征
2.1 概述
2.2 实验部分
2.2.1 实验材料与仪器
2.2.2 壳聚糖的叶酸修饰及纯化
2.2.2.1 壳聚糖的叶酸修饰
2.2.2.2 叶酸-壳聚糖的纯化
2.2.3 叶酸-壳聚糖的表征
2.2.3.1 薄层色谱法
2.2.3.2 红外光谱法
2.2.3.3 核磁共振氢谱法
2.2.4 叶酸-壳聚糖结合率的评价
2.2.4.1 叶酸标准曲线的建立
2.2.4.2 叶酸-壳聚糖结合率的计算方法
2.2.5 叶酸修饰壳聚糖的条件优化
2.2.5.1 单因素考察
2.2.5.2 正交实验
2.2.5.3 最优条件的验证
2.3 结果与讨论
2.3.1 壳聚糖的叶酸修饰
2.3.2 叶酸-壳聚糖的表征
2.3.2.1 薄层色谱法
2.3.2.2 红外光谱法
2.3.2.3 核磁共振氢谱法
2.3.3 叶酸标准曲线的建立
2.3.4 叶酸修饰壳聚糖的条件优化
2.3.4.1 单因素考察
2.3.4.2 正交实验
2.3.4.3 最优反应条件的验证
2.4 本章小结
第三章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备及其表征
3.1 概述
3.2 实验部分
3.2.1 实验材料与仪器
3.2.2 纳米硒的制备方法
3.2.2.1 储备液的配制
3.2.2.2 纳米硒的制备
3.2.3 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备
3.2.4 纳米硒及叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的表征
3.2.4.1 粒径及粒径分布
3.2.4.2 Zeta电位
3.2.4.3 形态特征
3.2.5 纳米硒及修饰纳米硒的物理稳定性
3.2.5.1 纳米硒及修饰纳米硒的聚集、沉降特点
3.2.5.2 纳米硒及修饰纳米硒的粒径变化
3.3 结果与讨论
3.3.1 纳米硒的制备
3.3.2 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备
3.3.3 纳米硒及叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的表征
3.3.3.1 平均粒径及其分布
3.3.3.2 Zeta电位
3.3.4 纳米硒及修饰纳米硒的物理稳定性
3.3.4.1 纳米硒及修饰纳米硒的聚集、沉降特点
3.3.4.2 纳米硒及修饰纳米硒的粒径变化
3.4 本章小结
第四章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的靶向性及抗癌效果评价
4.1 概述
4.2 实验部分
4.2.1 实验材料与设备
4.2.2 细胞的复苏
4.2.3 细胞的传代
4.2.4 样品的配制
4.2.4.1 储备液的配制
4.2.4.2 样品的制备
4.2.5 体外细胞毒性实验
4.2.5.1 实验设计
4.2.5.2 实验方法
4.2.6 统计学处理
4.3 结果与讨论
4.3.1 MTT法测定的细胞存活率
4.3.2 细胞存活率的统计学分析
4.4 本章小结
第五章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒与脂质体复合体系的构建
5.1 概述
5.2 实验部分
5.2.1 实验材料与仪器
5.2.2 负载荧光素脂质体的制备
5.2.3 荧光素分析方法的建立
5.2.3.1 荧光素激发波长和发射波长的确定
5.2.3.2 荧光素标准曲线的建立
5.2.4 脂质体与游离荧光素的分离
5.2.4.1 透析时间的确定
5.2.4.2 分离方法的验证
5.2.5 脂质体包封率的评价
5.2.6 FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的构建
5.2.6.1 储备液的配制
5.2.6.2 FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的构建
5.2.7 脂质体及FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的表征
5.2.7.1 形态特征
5.2.7.2 粒径分布及Zeta电位
5.2.8 荧光素的体外释放研究
5.2.9 荧光素的细胞摄取实验
5.2.9.1 实验设计
5.2.9.2 细胞的传代与复苏
5.2.9.3 细胞的接种与加样
5.2.9.4 荧光显微镜观察及荧光素摄取量的比较
5.2.10 统计学分析
5.3 结果与讨论
5.3.1 荧光素分析方法的建立
5.3.1.1 荧光素激发光波长及发射光波长的确定
5.3.1.2 荧光素标准曲线的建立
5.3.2 脂质体与未包封荧光素的分离
5.3.2.1 透析时间的确定
5.3.2.2 分离方法的验证
5.3.3 脂质体的包封率
5.3.4 脂质体及FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的表征
5.3.4.1 形态特征
5.3.4.2 脂质体的平均粒径及粒径分布
5.3.4.3 Zeta电位
5.3.5 荧光素的体外释放研究
5.3.6 荧光素的细胞摄取实验
5.3.6.1 荧光显微镜
5.3.6.2 荧光强度的定量分析
5.3.6.3 细胞荧光强度的统计学分析
5.4 本章小结
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
本文编号：3098275
【文章来源】：青岛科技大学山东省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
符号说明
前言
第一章 绪论
1.1 硒的性质
1.1.1 硒的种类
1.1.2 硒的生物活性
1.1.3 硒的毒性
1.2 纳米硒的毒性及影响因素
1.2.1 纳米硒的毒性
1.2.2 影响纳米硒毒性的因素
1.2.2.1 剂量的影响
1.2.2.2 形态的影响
1.2.2.3 粒径的影响
1.2.2.4 电荷的影响
1.3 纳米硒的制备方法
1.3.1 化学法制备纳米硒
1.3.2 物理法制备纳米硒
1.3.3 生物法制备纳米硒
1.4 纳米硒的应用
1.4.1 抗癌活性
1.4.2 抑菌活性
1.4.3 抗炎及抗氧化
1.4.4 其他应用
1.5 纳米硒的修饰
1.5.1 多糖的修饰
1.5.2 电荷的修饰
1.5.3 靶向性配体的修饰
1.6 壳聚糖及其衍生物
1.6.1 壳聚糖及其衍生物的性质
1.6.2 壳聚糖及其衍生物在药物传递系统中的应用
1.6.3 壳聚糖及其衍生物在纳米硒制备中的应用
1.7 叶酸在靶向给药系统中的应用
1.7.1 叶酸与叶酸受体
1.7.2 叶酸在靶向给药系统中的应用
1.8 联合纳米硒给药的药物传递系统
1.9 本课题的研究目的及意义
第二章 壳聚糖的叶酸修饰及其表征
2.1 概述
2.2 实验部分
2.2.1 实验材料与仪器
2.2.2 壳聚糖的叶酸修饰及纯化
2.2.2.1 壳聚糖的叶酸修饰
2.2.2.2 叶酸-壳聚糖的纯化
2.2.3 叶酸-壳聚糖的表征
2.2.3.1 薄层色谱法
2.2.3.2 红外光谱法
2.2.3.3 核磁共振氢谱法
2.2.4 叶酸-壳聚糖结合率的评价
2.2.4.1 叶酸标准曲线的建立
2.2.4.2 叶酸-壳聚糖结合率的计算方法
2.2.5 叶酸修饰壳聚糖的条件优化
2.2.5.1 单因素考察
2.2.5.2 正交实验
2.2.5.3 最优条件的验证
2.3 结果与讨论
2.3.1 壳聚糖的叶酸修饰
2.3.2 叶酸-壳聚糖的表征
2.3.2.1 薄层色谱法
2.3.2.2 红外光谱法
2.3.2.3 核磁共振氢谱法
2.3.3 叶酸标准曲线的建立
2.3.4 叶酸修饰壳聚糖的条件优化
2.3.4.1 单因素考察
2.3.4.2 正交实验
2.3.4.3 最优反应条件的验证
2.4 本章小结
第三章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备及其表征
3.1 概述
3.2 实验部分
3.2.1 实验材料与仪器
3.2.2 纳米硒的制备方法
3.2.2.1 储备液的配制
3.2.2.2 纳米硒的制备
3.2.3 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备
3.2.4 纳米硒及叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的表征
3.2.4.1 粒径及粒径分布
3.2.4.2 Zeta电位
3.2.4.3 形态特征
3.2.5 纳米硒及修饰纳米硒的物理稳定性
3.2.5.1 纳米硒及修饰纳米硒的聚集、沉降特点
3.2.5.2 纳米硒及修饰纳米硒的粒径变化
3.3 结果与讨论
3.3.1 纳米硒的制备
3.3.2 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的制备
3.3.3 纳米硒及叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的表征
3.3.3.1 平均粒径及其分布
3.3.3.2 Zeta电位
3.3.4 纳米硒及修饰纳米硒的物理稳定性
3.3.4.1 纳米硒及修饰纳米硒的聚集、沉降特点
3.3.4.2 纳米硒及修饰纳米硒的粒径变化
3.4 本章小结
第四章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒的靶向性及抗癌效果评价
4.1 概述
4.2 实验部分
4.2.1 实验材料与设备
4.2.2 细胞的复苏
4.2.3 细胞的传代
4.2.4 样品的配制
4.2.4.1 储备液的配制
4.2.4.2 样品的制备
4.2.5 体外细胞毒性实验
4.2.5.1 实验设计
4.2.5.2 实验方法
4.2.6 统计学处理
4.3 结果与讨论
4.3.1 MTT法测定的细胞存活率
4.3.2 细胞存活率的统计学分析
4.4 本章小结
第五章 叶酸-壳聚糖修饰纳米硒与脂质体复合体系的构建
5.1 概述
5.2 实验部分
5.2.1 实验材料与仪器
5.2.2 负载荧光素脂质体的制备
5.2.3 荧光素分析方法的建立
5.2.3.1 荧光素激发波长和发射波长的确定
5.2.3.2 荧光素标准曲线的建立
5.2.4 脂质体与游离荧光素的分离
5.2.4.1 透析时间的确定
5.2.4.2 分离方法的验证
5.2.5 脂质体包封率的评价
5.2.6 FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的构建
5.2.6.1 储备液的配制
5.2.6.2 FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的构建
5.2.7 脂质体及FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的表征
5.2.7.1 形态特征
5.2.7.2 粒径分布及Zeta电位
5.2.8 荧光素的体外释放研究
5.2.9 荧光素的细胞摄取实验
5.2.9.1 实验设计
5.2.9.2 细胞的传代与复苏
5.2.9.3 细胞的接种与加样
5.2.9.4 荧光显微镜观察及荧光素摄取量的比较
5.2.10 统计学分析
5.3 结果与讨论
5.3.1 荧光素分析方法的建立
5.3.1.1 荧光素激发光波长及发射光波长的确定
5.3.1.2 荧光素标准曲线的建立
5.3.2 脂质体与未包封荧光素的分离
5.3.2.1 透析时间的确定
5.3.2.2 分离方法的验证
5.3.3 脂质体的包封率
5.3.4 脂质体及FA-CS-SeNPs-Lips复合体系的表征
5.3.4.1 形态特征
5.3.4.2 脂质体的平均粒径及粒径分布
5.3.4.3 Zeta电位
5.3.5 荧光素的体外释放研究
5.3.6 荧光素的细胞摄取实验
5.3.6.1 荧光显微镜
5.3.6.2 荧光强度的定量分析
5.3.6.3 细胞荧光强度的统计学分析
5.4 本章小结
结论
参考文献
致谢
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