吉非替尼按时辰给药对荷瘤裸鼠的药效学影响及机制研究

发布时间：2017-04-16 14:03

  本文关键词：吉非替尼按时辰给药对荷瘤裸鼠的药效学影响及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过对非小细胞肺癌移植瘤模型裸鼠时辰给药,研究吉非替尼不同时间点给药对肿瘤的抑制效果,并探讨EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK通路讨论其可能作用机制。方法:1.造模与分组:建立HCC827非小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型,按照时间点随机分为六组(04:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00),每组各有实验组和对照组。2.给药:实验组灌胃给药吉非替尼混悬液,模型组给予相同量的体积分数为1%的吐温80溶液,连续给药21天。3.药效学指标检测:根据测量的肿瘤长径和短径,计算并绘制肿瘤体积生长曲线。第21天处死荷瘤裸鼠后,剥离肿瘤组织,称取肿瘤重量,计算抑瘤率。4.基因表达检测:用实时荧光定量PCR检测各组荷瘤裸鼠肿瘤组织中EGFR、AKT、m TOR和ERK1/2的信使RNA的相对表达量。5.蛋白表达检测:western-blot检测各组荷瘤裸鼠肿瘤组织中P-EGFR、P-AKT、P-mTOR、P-ERK蛋白质的相对表达量。6.细胞凋亡检测:采用TUNEL染色法检测肿瘤组织切片中肿瘤细胞凋亡率。结果:1.与模型组相比,实验组各组荷瘤裸鼠肿瘤体积增长缓慢,差异具有统计学意义(P0.05),与20:00组相比,4:00,8:00和12:00组生长较慢,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,除20:00外,实验组裸鼠移植瘤重量均比模型组要低(P0.05),肿瘤抑瘤率8:00组最高,20:00组最低。2.与模型组相比,4:00、8:00组EGFR mRNA的相对表达量比较低(P0.05),8:00组与16:00、20:00组比较表达量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00三个组中AKT m RNA的相对表达量降低(P0.05),8:00和12:00组与16:00、20:00、24:00组比较表达量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00组mTOR的mRNA的相对表达量降低(P0.05),4:00、8:00组与20:00组mRNA的相对表达量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00组的ERK1/2 mRNA的相对表达量降低(P0.05),4:00、8:00组与20:00、24:00组相比表达量降低(P0.05)。3.与模型组相比,P-EGFR蛋白的表达在4:00、8:00、12:00和24:00明显降低(P0.05);P-AKT蛋白在4:00和8:00的表达量明显降低(P0.05);P-mTOR蛋白的相对表达量表达在4:00和8:00明显降低(P0.05);P-ERK1/2蛋白表达在4:00、8:00、24:00表达量明显降低(P0.05)。4.与模型组相比,4:00、8:00和12:00组肿瘤组织细胞凋亡率明显高于其他组。结论:吉非替尼对荷瘤裸鼠的移植瘤具有抑制作用,并且呈现出明显的时辰节律性的差异,4:00,8:00和12:00的抑制效果比16:00,20:00和24:00的好,其中8:00肿瘤抑制效果最好,20:00抑制效果最差,这种抑制作用产生的机制可能是通路抑制EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK传导通路的信号传导有关。
【关键词】：吉非替尼 时辰药理学 药效学 作用机制
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 第一章 非小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的建立及模拟时辰给药实验11-14
• 1.1 实验材料11-12
• 1.1.1 实验动物和细胞株11
• 1.1.2 试剂11
• 1.1.3 仪器11-12
• 1.2 实验方法12-13
• 1.2.1 细胞培养12
• 1.2.2 细胞复苏12
• 1.2.3 细胞传代12
• 1.2.4 细胞收集12-13
• 1.3 动物模型制作13
• 1.4 分组及给药13-14
• 第二章 吉非替尼按时辰给药对荷瘤裸鼠的药效学影响14-24
• 2.1 实验材料14
• 2.1.1 试剂14
• 2.1.2 仪器14
• 2.2 实验方法14-16
• 2.2.1 肿瘤体积变化和抑瘤率计算14
• 2.2.2 肿瘤组织病理学检测14-15
• 2.2.3 肿瘤组织细胞凋亡率检测15-16
• 2.2.4 统计学分析16
• 2.3 实验结果16-22
• 2.3.1 吉非替尼不同时辰点给药对肿瘤体积变化和抑瘤率的影响16-18
• 2.3.2 吉非替尼不同时间点给药荷瘤裸鼠移植瘤组织病理学检测18-19
• 2.3.3 吉非替尼不同时间点给药荷瘤裸鼠移植瘤细胞凋亡检测19-22
• 2.4 讨论22-23
• 2.5 结论23-24
• 第三章 吉非替尼按时辰给药对荷瘤裸鼠的时辰药理学作用机制的研究24-53
• 3.1 实验材料24-25
• 3.1.1 试剂24
• 3.1.2 仪器24-25
• 3.2 实验方法25-31
• 3.2.1 qRT-PCR检测相关基因表达25-28
• 3.2.1.1 肿瘤组织总RNA抽提25
• 3.2.1.2 RNA浓度与纯度检测25
• 3.2.1.3 逆转录25-26
• 3.1.1.4 qRT-PCR扩增26-28
• 3.2.2 Western blot检测荷瘤裸鼠肿瘤组织中相关蛋白的表达28-31
• 3.2.2.1 组织中总蛋白质提取28
• 3.2.2.2 蛋白质浓度测定28-29
• 3.2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）29-30
• 3.2.2.4 转膜30
• 3.2.2.5 抗原抗体反应30-31
• 3.2.2.6 显影31
• 3.2.3 统计学分析31
• 3.3 实验结果31-51
• 3.3.1 吉非替尼不同时辰给药对荷瘤裸鼠肿瘤组织中相关基因表达的影响31-47
• 3.3.1.1 荷瘤裸鼠移植瘤组织内 EGFR m RNA 在不同时间点的表达32-36
• 3.3.1.2 荷瘤裸鼠肿瘤组织中AKT mRNA在不同时间点的表达36-40
• 3.3.1.3 荷瘤裸鼠肿瘤组织中mTOR mRNA在不同时间点的表达40-44
• 3.3.1.4 肿瘤组织内ERK mRNA在不同时辰点的表达44-47
• 3.3.2 吉非替尼不同时间点给药对荷瘤裸鼠移植瘤组织中相关蛋白表达的影响47-51
• 3.3.2.1 荷瘤裸鼠肿瘤组织内P-EGFR在不同时间点的相对定量表达结果47-48
• 3.3.2.2 荷瘤裸鼠肿瘤组织内蛋白P-AKT在不同时间点的相对定量表达结果48-49
• 3.3.2.3 荷瘤裸鼠肿瘤组织内P-mTOR在不同时间点的相对定量表达结果49-50
• 3.3.2.4 荷瘤裸鼠肿瘤组织内P-ERK在不同时间点的相对定量表达结果50-51
• 3.4 讨论51-52
• 3.5 结论52-53
• 小结53-54
• 参考文献54-58
• 综述58-66
• 参考文献63-66
• 攻读学位期间的研究成果66-67
• 附录 英文缩写词表67-68
• 致谢68-69

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