RhoA/ROCK信号通路在脂多糖诱导内皮细胞损伤中的作用及二苯乙烯苷（TSG）的干预研究

发布时间：2021-04-26 05:55

　　目的建立脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤模型,研究Rho A/ROCK信号通路及二苯乙烯苷（Tetrahydroxystilbene glucoside,TSG）干预在LPS诱导内皮细胞损伤中的作用。方法购买人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVECs）贴壁培养。采用MTT法、流式细胞仪及LDH（乳酸脱氢酶）检测试剂盒筛选出LPS诱导内皮细胞损伤的最佳作用时间和浓度。采用正常组（Control）、TSG单独处理组（100μM,24 h）、模型组（100μg/ml LPS,作用24 h）、TSG（10、25、50、100μM）预处理24 h+LPS处理组（TSG预处理24 h后,加入终浓度为100μg/ml LPS作用24h）,应用MTT法检测细胞存活率,PI/Annexin V-FITC双染色通过流式细胞仪检测细胞凋亡,LDH检测试剂盒测定LDH的释放,免疫荧光技术检测F-actin的形态和分布,应用Western Blot技术检测Ras同源基因家族成员A（Ra... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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第一章 绪论
第二章 材料与方法
    2.1 研究资料及仪器设备
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要仪器与试剂
        2.1.3 主要溶液配制
    2.2 实验流程与方法
        2.2.1 细胞培养与鉴定
        2.2.2 细胞冻存
        2.2.3 细胞复苏
        2.2.4 实验分组
        2.2.5 MTT法
        2.2.6 鬼笔环肽（Phalloidine）染色
        2.2.7 siRNA转染
        2.2.8 蛋白样品提取
        2.2.9 蛋白质定量（BCA法）及配平
        2.2.10 WesternBlot
        2.2.11 AnnexinV-FITC/PI凋亡检测
        2.2.12 LDH释放检测
        2.2.13 统计学处理分析
第三章 结果
    3.1 内皮细胞鉴定
    3.2 LPS对HUVECs细胞的毒性作用
        3.2.1 LPS降低内皮细胞存活率
        3.2.2 LPS促进HUVECs的LDH释放
        3.2.3 LPS促进HUVECs的凋亡
    3.3 TSG显著抑制LPS诱导的HUVECs细胞毒性
        3.3.1 TSG显著提高LPS诱导的内皮细胞存活率的降低
        3.3.2 TSG显著抑制LPS诱导的LDH释放
        3.3.3 TSG显著抑制LPS诱导的内皮细胞凋亡
    3.4 TSG抑制LPS诱导的RhoA表达
    3.5 TSG显著抑制LPS诱导的ROCK表达及活化
        3.5.1 TSG显著抑制LPS诱导的ROCK表达
        3.5.2 TSG显著抑制LPS诱导的ROCK活化
    3.6 干扰RhoA/ROCK通路可显著降低LPS诱导的细胞毒性
        3.6.1 RhoA、ROCK1、ROCK2沉默的鉴定
        3.6.2 沉默RhoA/ROCK信号通路可显著提升内皮细胞存活率
        3.6.3 沉默RhoA/ROCK信号通路可显著降低LPS诱导的LDH释放
        3.6.4 沉默RhoA/ROCK信号通路可显著降低LPS诱导的内皮细胞凋亡
    3.7 沉默RhoA/ROCK信号通路可显著改善LPS诱导的F-actin骨架形态变化
    3.8 TSG可显著抑制LPS诱导的F-actin骨架改变
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
综述 RhoA/ROCK信号通路及与内皮功能障碍
    参考文献
英文缩写词表
致谢



本文编号：3160864