p31-comet/MAD2在胶质瘤中的功能研究以及MiR-146a在肝癌中的功能研究

发布时间：2021-06-05 16:38

　　MAD2（有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1,MAD2L1）是细胞有丝分裂过程中纺锤体组装检测点的重要功能蛋白,与染色体稳定性密切相关。p31-comet是MAD2的结合蛋白,能够抑制MAD2的功能,与有丝分裂检测点沉默和有丝分裂退出有关。在细胞有丝分裂过程中,有丝分裂检测点功能异常会造成染色体不稳定性,最终可导致细胞癌变。在胶质瘤组织中的,MAD2表达水平异常,显著高于正常脑组织,然而其在胶质瘤中的功能仍是未知。在本研究中,我们利用慢病毒介导敲减MAD2或过表达p31-comet来研究内源性MAD2和p31-comet在胶质瘤中的功能,结果表明敲减MAD2或过表达p31-comet能有效抑制胶质瘤细胞U87和U251的增殖、存活以及迁移能力。进一步的探究发现敲减MAD2或过表达p31-comet能阻滞细胞周期、影响周期相关蛋白的表达以及促进细胞衰老。此外,我们还研究了MAD2和p31-comet对胶质瘤细胞耐药性的影响。采用PTX和VBL两种不同的微管抑制剂,我们发现敲减MAD2或过表达p31-comet能显著提高U87和U251细胞对PTX和VBL的耐受性。综上所述,我们的研究证明了内源性... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要1
Abstract 1
摘要2
Abstract 2
缩略词索引
第一部分 P31-comet/MAD2在胶质瘤中的功能研究
    第1章 前言
        1.1 胶质瘤研究背景
            1.1.1 恶性胶质瘤发病过程
            1.1.2 胶质瘤侵袭
            1.1.3 恶性神经胶质瘤的治疗现状
        1.2 MAD2的研究背景
            1.2.1 MAD2蛋白结构与功能
            1.2.2 MAD2与染色体不稳定性
            1.2.3 MAD2与癌症
        1.3 p31-comet的研究背景
            1.3.1 p31-comet的结构与功能
            1.3.2 p31-comet与肿瘤
        1.4 微管与微管抑制剂
            1.4.1 微管的结构与功能
            1.4.2 微管抑制剂的作用机制
            1.4.3 微管抑制剂耐药机制
        1.5 SAC与微管抑制剂
    第2章 实验材料与方法
        2.1 细胞培养
        2.2 质粒构建
            2.2.1 干扰质粒的构建
            2.2.2 过表达质粒的构建
        2.3 筛选有效的干扰或过表达治疗
        2.4 慢病毒的包装
        2.5 慢病毒感染细胞实验
        2.6 蛋白样品制备
        2.7 蛋白免疫印迹分析(Western Blot)
            2.7.1 配制SDS-PAGE凝胶
            2.7.2 电泳
            2.7.3 转膜
            2.7.4 封闭
            2.7.5 孵育一抗
            2.7.6 孵育二抗
            2.7.7 影
        2.8 细胞增殖实验
        2.9 克隆形成实验
        2.10 细胞周期实验
        2.11 细胞衰老检测
        2.12 Transwell迁移实验
        2.13 药敏实验
        2.14 数据统计
    第3章 实验结果
        3.1 慢病毒有效性验证
            3.1.1 Western blot验证干扰后MAD2的蛋白水平
            3.1.2 Western blot验证过表达p31-comet病毒的有效性
        3.2 敲减MAD2或过表达p31-comet抑制胶质瘤细胞的增殖和存活能力
            3.2.1 敲减MAD2或过表达p31-comet抑制胶质瘤细胞的增殖能力
            3.2.2 敲减MAD2或过表达p31-comet抑制胶质瘤细胞的克隆形成
        3.3 敲减MAD2影响了胶质瘤细胞的周期分布
        3.4 敲减MAD2或过表达p31-comet影响有丝分裂相关蛋白的表达
            3.4.1 敲减MAD2影响有丝分裂相关蛋白的表达
            3.4.2 过表达p31-comet影响有丝分裂相关蛋白的表达
        3.5 敲减MAD2或过表达p31-comet促进胶质瘤细胞衰老
            3.5.1 敲减MAD2促进胶质瘤细胞衰老
            3.5.2 过表达p31-comet促进胶质瘤细胞衰老
        3.6 敲减MAD2或过表达p31-comet抑制胶质瘤细胞的迁移
            3.6.1 敲减MAD2抑制胶质瘤细胞的迁移
            3.6.2 过表达p31-comet抑制胶质瘤细胞的迁移
        3.7 敲减MAD2或过表达p31-comet促进胶质瘤细胞对微管抑制剂的耐受性
            3.7.1 敲减MAD2促进胶质瘤细胞对微管抑制剂的耐受性
            3.7.2 过表达p31-comet促进胶质瘤细胞对微管抑制剂的耐受性
        3.8 敲减MAD2降低微管抑制剂对胶质瘤细胞周期分布的影响
        3.9 敲减MAD2或过表达p31-comet降低微管抑制剂对胶质瘤细胞周期相关蛋白表达的影响
            3.9.1 敲减MAD2降低微管抑制剂对胶质瘤细胞周期相关蛋白表达的影响
            3.9.2 过表达p31-comet降低微管抑制剂对胶质瘤细胞周期相关蛋白表达的影响
    第4章 讨论
    第5章 结论
第二部分 MiR-146a在肝癌中的功能研究
    第1章 前言
        1.1 肝癌的简介
            1.1.1 肝癌发生发展的分子机制
            1.1.2 肝癌的诊断和治疗
            1.1.3 肝癌的复发与转移
        1.2 MiR-146a的研究背景
            1.2.1 MiR-146家族概述
            1.2.2 MiR-146a的靶基因与功能
            1.2.3 MiR-146a与自身免疫疾病
            1.2.4 MiR-146a与癌症
        1.3 TRAF6
    第2章 实验材料与方法
        2.1 细胞培养
        2.2 临床样本的收集
        2.3 RNA提取
        2.4 定量PCR
        2.5 裸鼠成瘤实验
        2.6 数据统计
    第3章 实验结果
        3.1 miR-146a在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况
        3.2 TRAF6在在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况
        3.3 miR-146a/TRAF6对肝癌细胞在裸鼠体内生长的影响
    第4章 讨论
    第5章 结论
参考文献
致谢
附录Ⅰ 在校期间发表的文章和专利


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeting Wnt/β-catenin pathway in hepatocellular carcinoma treatment[J]. Valery Vilchez,Lilia Turcios,Francesc Marti,Roberto Gedaly.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[2]Clusterin:Review of research progress and looking ahead to direction in hepatocellular carcinoma[J]. Peng Xiu,Xiao-Feng Dong,Xin-Ping Li,Jie Li.  World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
[3]Radiation therapy has been shown to be adaptable for various stages of hepatocellular carcinoma[J]. Yasuteru Kondo,Osamu Kimura,Tooru Shimosegawa.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)



本文编号：3212524