细胞周期蛋白依赖性激酶1促进DNA合成并介导肿瘤细胞化疗耐受的作用机制研究

发布时间：2021-07-03 01:28

　　细胞周期蛋白依赖性激酶1（Cyclin dependent kinase 1,CDK1）对细胞生存至关重要,在很多生物学过程中都发挥着必不可少的作用,包括细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞周期检查位点激活等。本课题研究发现CDK1在S期促进新生DNA链的合成,丰富了对CDK1功能的认识。我们发现利用小分子化合物在不引起细胞周期变化的情况下抑制CDK1,可以引起显著的DNA损伤反应,包括γH2AX和RPA的磷酸化,且呈现浓度依赖性和时间依赖性。进一步研究发现抑制CDK1引起的DNA损伤与DNA复制相关,并最终导致基因组的不稳定性。本研究还发现抑制CDK1的活性可以明显增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,包括PARP抑制剂Olaparib—一种新型的抗肿瘤特效药。这些发现揭示了 CDK1的多功能性,对肿瘤化疗中的联合用药可能具有一定的借鉴意义。 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．短时间抑制ＣＤＫｌ能以时间依赖和浓度依赖的方式导致ＤＮＡ损伤反应

ｆｏｃｉ在复制期细胞和非复制细胞中的分布。我们胸腺嘧啶类似物用ＥｄＵ染色来标??记ＤＮＡ复制，ＥｄＵ阳性则表明细胞发生ＤＮＡ复制。结果显示短时间抑制ＣＤＫ１??主要在ＥｄＵ阳性细胞中导致了显著的ＤＮＡ损伤反应（图２Ａ－Ｂ）。进而通过对单??细胞进行分析，我们观察到大部分的ｙＨ２ＡＸｆｏｃｉ点与ＤＮＡ复制位点共定位，说明??抑制ＣＤＫ１引起的ＤＮＡ损伤确实与复制相关。此外，我们应用了明确能引起ＤＮＡ??复制相关损伤的顺铂作为阳性对照，结果表明其引起的ＥｄＵ－ＹＨ２ＡＸ共定位比例与??抑制ＣＤＫ１接近（图２Ｃ－Ｄ），而通过化学切割ＤＮＡ链造成复制无关的ＤＮＡ损伤??的博莱霉素并未引起与ＥｄＵ共定位的ｙＨ２ＡＸ?ｆｏｃｉ?（图２Ｃ－Ｄ），这些结果证实了短??时间抑制ＣＤＫ１确实通过作用于ＤＮＡ复制从而引起损伤反应。当用一种ＤＮＡ聚??合酶抑制剂阿非迪霉素完全阻滞ＤＮＡ复制时，抑制ＣＤＫ１未能引起ＤＮＡ损伤反??应，再次佐证了?ＣＤＫ１防止ＤＮＡ复制相关损伤的作用（图２Ｅ）。综上所述，这些??结果表明ＣＤＫ１在防止复制相关的ＤＮＡ损伤中发挥重要作用

实验结果??结果，我们运用胸腺嘧啶双阻断法将细胞同步在Ｇ１／Ｓ转换点，再释放细胞进入Ｓ??期，然后在不同的时间点用ＥｄＵ标记ＤＮＡ合成（图３Ｄ），再利用流式细胞术分??析ＥｄＵ荧光强度，定量检测抑制ＣＤＫ１对于ＤＮＡ新生链合成的影响。结果显示??在Ｓ期不同阶段抑制ＣＤＫ１都导致了?ＥｄＵ荧光强度显著减少，特别是Ｓ期中期（图??３Ｅ）。这些结果都说明了?ＣＤＫ１对于Ｓ期新生ＤＮＡ的有效合成是必需的。此前有??观点认为：在有丝分裂之前


本文编号：3261583