艾司洛尔对脓毒症大鼠的心肌保护作用及其可能机制
发布时间：2021-07-11 11:54
目的:通过观察艾司洛尔对脓毒症大鼠的生存情况、心肌病理、心肌酶学及炎症介质的影响,检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的活化情况,进而探讨艾司洛尔在脓毒症大鼠中的心肌保护作用及其可能机制,为艾司洛尔治疗脓毒症心肌病提供理论依据。方法:选取60只雄性清洁级SD大鼠作为研究对象,采用随机数字法随机分为3组:假手术组（Sham group,Sham组）、脓毒症组（Model group,Model组）、艾司洛尔组（Esmolol group,ES组）,每组20只。Sham组行盲肠探查术,Model组、ES组采用盲肠结扎穿孔法（CLP法）建立脓毒症大鼠模型。术后,ES组持续微量泵泵入艾司洛尔稀释液1ml/h[15mg·kg-1·h-1],共计6h。Sham组、Model组泵入生理盐水1ml/h,共计6h。术后24小时观察各组大鼠生存情况,取腹主动脉血,检测肌钙蛋白I（TnI）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）表达量,取左心室游离壁行HE染色观察心肌病理学变化,Western blot法检测Toll样受体-4（Toll-like receptor 4,TLR4...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLR4/MyD88/NF-κB蛋白信号通路结构示意图
青岛大学硕士学位论文8（3）检测步骤：如图2所示。图2酶联免疫吸附法步骤（4）结果判读：用酶标仪450nm波长测定OD值，计算标准品、样品的平均OD值，以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中TNF-α含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。（5）同样方法步骤测血清中IL-1β的浓度。2.6WesternBlot测心肌组织TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达量（1）总蛋白的提取：电子天平称取100mg心肌组织，组织剪剪碎心肌组织，按每20mg组织加入200mg组织细胞裂解液，用玻璃匀浆器匀浆，裂解后的样品12000r/min离心10min，取上清液即总蛋白溶液。（2）BCA法蛋白浓度测定①蛋白标准品的制备：取0.8ml蛋白标准配置液加入到蛋白标准（BSA）中，充分溶解后配置成25mg/ml的蛋白标准溶液。取20ml蛋白标准溶液加入980mlPBS中稀释，即配得0.5mg/ml蛋白标准。②BCA工作液的配置：将试剂A：试剂B按50：1配置成BCA工作液，充分混匀，现用现配。③蛋白浓度检测：将蛋白标准品按0、1、2、4、8、12、16、20ml加入到96
青岛大学硕士学位论文12结果1艾司洛尔对大鼠生存情况的影响1.1艾司洛尔对大鼠存活率的影响本实验共观察24小时，其中假手术组死亡2只，存活率为90.0%；脓毒症组死亡9只，存活率为55.0%；艾司洛尔组死亡7只，存活率为65.0%。脓毒症组存活率较假手术组显著降低（x2=6.14，P＜0.05），艾司洛尔组与脓毒症组之间大鼠存活率无显著性差异（x2=0.42，P＞0.05）。（图3）1.2艾司洛尔对大鼠行为学的影响CLP术后6h，脓毒症组大鼠均出现活动减少、精神萎靡、毛发竖立、寒战，术后12h大鼠出现嗜睡、毛色枯萎、蜷缩于鼠笼角落、眼鼻出血、腹泻等脓毒症症状。假手术组大鼠伤口愈合良好，毛色洁白有光泽，活动度好，正常进食。艾司洛尔组大鼠状态与脓毒症组相比，其感染中毒症状较轻，但相对于假手术组状态较差。图3各组大鼠24小时生存率注：Model组与Sham组比较，存活率降低，#P＜0.05；ES组与Model组比较，存活率升高，※P＞0.052艾司洛尔对大鼠心肌病理学的影响光镜下假手术组心肌细胞结构正常，纤维肌丝束排列紧密，未见明显水肿、充血、变性及坏死；脓毒症组可见心肌细胞大量坏死，呈空泡样变性，心肌纤维明显水肿，排列疏松，部分心肌纤维断裂，细胞核肿胀，间质水肿、炎性细胞浸润；艾司洛尔组与脓毒症组相比仍有少量炎性细胞浸润，但心肌细胞坏死减少，心肌纤维排列欠规整，
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道微生态的生理学进展研究[J]. 马晓宁,赵启文. 医学食疗与健康. 2020(01)
[2]脓毒症型心肌病的研究进展[J]. 王颍骅,何奔. 心血管病学进展. 2019(08)
[3]β肾上腺素受体在心血管系统的基础与临床研究进展[J]. 关开行,王文景,姜允奇,李子健. 中国心血管杂志. 2019(05)
[4]脓毒症相关性脑病的研究进展[J]. 张梦芹,杨洋,蒋永泼,林荣海,朱佳佳. 浙江医学. 2019(19)
[5]脓毒性心肌病相关研究[J]. 于健,朱丹丹,王晓曼. 实用休克杂志(中英文). 2019(05)
[6]阿托伐他汀对脓毒症大鼠心肌保护的研究[J]. 王之余,赫太平,顾金萍,曲茂兴,于健. 实用休克杂志(中英文). 2019(04)
[7]艾司洛尔对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡炎症因子及氧化应激蛋白的调控研究[J]. 武冬,王顺达,符莹莹,刘丹平,周朝霞. 中南医学科学杂志. 2019(04)
[8]脓毒性脑病的神经化学机制研究进展[J]. 金晔,赵博伦,韩晓菲,刘庆平,王欢. 生命科学研究. 2019(03)
[9]当归多糖对DPN大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制影响[J]. 周夏慧,王庆来,朱雪梅,潘蓉蓉,潘胜莲,朱方会,王丁,罗晓红. 中国临床药理学与治疗学. 2018(12)
[10]艾司洛尔联合早期目标导向治疗对重度脓毒症患者心肌功能的保护作用分析[J]. 黄道超,秦杰,单仁飞,蒋永泼,徐安忆,管琼婵. 中国现代医生. 2018(15)
硕士论文
[1]艾司洛尔对脓毒症大鼠脑保护作用的研究[D]. 李言鹏.兰州大学 2019
[2]艾司洛尔对脓毒症大鼠肺脏和肠道保护作用的实验研究[D]. 李杜鹏.兰州大学 2017
[3]艾司洛尔对脓毒症大鼠心肌保护作用的实验研究[D]. 方德舟.兰州大学 2016
本文编号：3278047
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLR4/MyD88/NF-κB蛋白信号通路结构示意图
青岛大学硕士学位论文8（3）检测步骤：如图2所示。图2酶联免疫吸附法步骤（4）结果判读：用酶标仪450nm波长测定OD值，计算标准品、样品的平均OD值，以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中TNF-α含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。（5）同样方法步骤测血清中IL-1β的浓度。2.6WesternBlot测心肌组织TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达量（1）总蛋白的提取：电子天平称取100mg心肌组织，组织剪剪碎心肌组织，按每20mg组织加入200mg组织细胞裂解液，用玻璃匀浆器匀浆，裂解后的样品12000r/min离心10min，取上清液即总蛋白溶液。（2）BCA法蛋白浓度测定①蛋白标准品的制备：取0.8ml蛋白标准配置液加入到蛋白标准（BSA）中，充分溶解后配置成25mg/ml的蛋白标准溶液。取20ml蛋白标准溶液加入980mlPBS中稀释，即配得0.5mg/ml蛋白标准。②BCA工作液的配置：将试剂A：试剂B按50：1配置成BCA工作液，充分混匀，现用现配。③蛋白浓度检测：将蛋白标准品按0、1、2、4、8、12、16、20ml加入到96
青岛大学硕士学位论文12结果1艾司洛尔对大鼠生存情况的影响1.1艾司洛尔对大鼠存活率的影响本实验共观察24小时，其中假手术组死亡2只，存活率为90.0%；脓毒症组死亡9只，存活率为55.0%；艾司洛尔组死亡7只，存活率为65.0%。脓毒症组存活率较假手术组显著降低（x2=6.14，P＜0.05），艾司洛尔组与脓毒症组之间大鼠存活率无显著性差异（x2=0.42，P＞0.05）。（图3）1.2艾司洛尔对大鼠行为学的影响CLP术后6h，脓毒症组大鼠均出现活动减少、精神萎靡、毛发竖立、寒战，术后12h大鼠出现嗜睡、毛色枯萎、蜷缩于鼠笼角落、眼鼻出血、腹泻等脓毒症症状。假手术组大鼠伤口愈合良好，毛色洁白有光泽，活动度好，正常进食。艾司洛尔组大鼠状态与脓毒症组相比，其感染中毒症状较轻，但相对于假手术组状态较差。图3各组大鼠24小时生存率注：Model组与Sham组比较，存活率降低，#P＜0.05；ES组与Model组比较，存活率升高，※P＞0.052艾司洛尔对大鼠心肌病理学的影响光镜下假手术组心肌细胞结构正常，纤维肌丝束排列紧密，未见明显水肿、充血、变性及坏死；脓毒症组可见心肌细胞大量坏死，呈空泡样变性，心肌纤维明显水肿，排列疏松，部分心肌纤维断裂，细胞核肿胀，间质水肿、炎性细胞浸润；艾司洛尔组与脓毒症组相比仍有少量炎性细胞浸润，但心肌细胞坏死减少，心肌纤维排列欠规整，
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道微生态的生理学进展研究[J]. 马晓宁,赵启文. 医学食疗与健康. 2020(01)
[2]脓毒症型心肌病的研究进展[J]. 王颍骅,何奔. 心血管病学进展. 2019(08)
[3]β肾上腺素受体在心血管系统的基础与临床研究进展[J]. 关开行,王文景,姜允奇,李子健. 中国心血管杂志. 2019(05)
[4]脓毒症相关性脑病的研究进展[J]. 张梦芹,杨洋,蒋永泼,林荣海,朱佳佳. 浙江医学. 2019(19)
[5]脓毒性心肌病相关研究[J]. 于健,朱丹丹,王晓曼. 实用休克杂志(中英文). 2019(05)
[6]阿托伐他汀对脓毒症大鼠心肌保护的研究[J]. 王之余,赫太平,顾金萍,曲茂兴,于健. 实用休克杂志(中英文). 2019(04)
[7]艾司洛尔对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡炎症因子及氧化应激蛋白的调控研究[J]. 武冬,王顺达,符莹莹,刘丹平,周朝霞. 中南医学科学杂志. 2019(04)
[8]脓毒性脑病的神经化学机制研究进展[J]. 金晔,赵博伦,韩晓菲,刘庆平,王欢. 生命科学研究. 2019(03)
[9]当归多糖对DPN大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制影响[J]. 周夏慧,王庆来,朱雪梅,潘蓉蓉,潘胜莲,朱方会,王丁,罗晓红. 中国临床药理学与治疗学. 2018(12)
[10]艾司洛尔联合早期目标导向治疗对重度脓毒症患者心肌功能的保护作用分析[J]. 黄道超,秦杰,单仁飞,蒋永泼,徐安忆,管琼婵. 中国现代医生. 2018(15)
硕士论文
[1]艾司洛尔对脓毒症大鼠脑保护作用的研究[D]. 李言鹏.兰州大学 2019
[2]艾司洛尔对脓毒症大鼠肺脏和肠道保护作用的实验研究[D]. 李杜鹏.兰州大学 2017
[3]艾司洛尔对脓毒症大鼠心肌保护作用的实验研究[D]. 方德舟.兰州大学 2016
本文编号：3278047
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