叶酸对阿尔茨海默病小鼠模型脑内Aβ沉积的抑制作用及其机制

发布时间：2017-04-26 06:01

  本文关键词：叶酸对阿尔茨海默病小鼠模型脑内Aβ沉积的抑制作用及其机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究叶酸(folic acid)作用于APP/PS1小鼠脑组织中APP淀粉样酶切途径的环节,探讨其抑制Aβ沉积的作用机制,为研究叶酸对阿尔茨海默病的防治作用提供科学依据。方法将6月龄雄性APP/PS1小鼠模型随机分为以下4组:AD叶酸缺乏组(folate-deficient diet plus daily gavage with water,AD+FA-D);AD叶酸对照组(control diet plus daily gavage with water,AD+FA-N);AD叶酸补充低剂量组(control diet plus daily gavage with 120μg/kg folic acid,AD+FA-L);AD叶酸补充高剂量组(control diet plus daily gavage with 600μg/kg folic acid,AD+FA-H)。APP/PS1小鼠模型同月龄野生型小鼠作为阴性对照组(control diet plus daily gavage with water,WT+FA-N)。AD+FA-D组饲以叶酸缺乏饲料,其它各组饲以对照饲料,AD+FA-L组灌胃120μg/kg bw·d叶酸溶液,AD+FA-H组灌胃600μg/kg bw·d叶酸溶液,其它各组灌胃双蒸水。每周称重一次,根据体重调整灌胃量,干预60d。采用IMMULITE、叶酸化学发光免疫试剂盒检测血清叶酸浓度;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测脑组织淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、BACE1、ADAM9、ADAM10、早老素1(presenilin 1,PS1)的m RNA水平;免疫印迹(Western Blot)检测脑组织APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表达;用免疫组化法检测脑组织β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ);用酶联免疫吸附(ELISA)检测脑组织中Aβ1 40和Aβ1 42的含量。结果叶酸干预60d后,化学免疫发光法检测的血清叶酸浓度结果为:在叶酸干预前,5组血清叶酸的浓度处于同一个水平,随着干预时间的变化,血清叶酸水平也有所改变。干预1w后,AD+FA-D组血清叶酸浓度低于其它各组;AD+FA-L组、AD+FA-H组与AD+FA-N组相比,血清叶酸水平提高(P0.05)。免疫组化检测脑组织Aβ蛋白结果显示:与AD+FA-N组相比,AD+FA-H组Aβ蛋白表达降低,AD+FA-D组表达升高,差异有统计学意义(P0.05),但AD+FA-L组无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。ELISA检测脑组织中Aβ1 40和Aβ1 42的含量结果显示:与AD+FA-N组相比,除WT+FA-N组Aβ1 40含量有所降低,其他四组均没有明显差别;与AD+FA-N组相比,AD+FA-H组Aβ1 42的含量降低,AD+FA-D组含量升高,差异有统计学意义(P0.05),但AD+FA-L组无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。RT-PCR检测脑组织APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1的m RNA水平显示:与AD+FA-N组相比,AD+FA-D组APP、BACE1、PS1的m RNA水平均升高,而ADAM9、ADAM10的m RNA水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);AD+FA-L组、AD+FA-H组APP、BACE1、PS1的m RNA水平均降低;而ADAM9、ADAM10的m RNA水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);Western Blot检测脑组织APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表达结果显示:与AD+FA-N组相比,AD+FA-D组APP、BACE1、PS1的蛋白水平均升高,而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);AD+FA-L组、AD+FA-H组APP、BACE1、PS1的蛋白水平均降低;而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);但是各组蛋白的NCT结果显示表达差异无统计学差异(P0.05)。结论叶酸补充减少了脑组织Aβ沉积以及Aβ1 42的含量,而叶酸缺乏增加了脑组织Aβ沉积以及Aβ1 42的含量。叶酸可能通过抑制小鼠脑组织的淀粉样蛋白生成途径的分泌酶APP、BACE1、PS1、NCT的m RNA水平和蛋白表达,减少Aβ的产生;增加小鼠脑组织的非淀粉样蛋白生成途径的分泌酶ADAM9、ADAM10的m RNA水平和蛋白表达,减少Aβ的沉积。
【关键词】：叶酸 阿尔茨海默病 分泌酶 β-淀粉样蛋白 APP/PS1小鼠
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、叶酸对AD小鼠模型Aβ 沉积的抑制作用16-32
• 1.1 对象和方法16-24
• 1.1.1.实验动物16
• 1.1.2 主要试剂16-17
• 1.1.3 仪器设备17
• 1.1.4 相关溶液及其配置方法17-18
• 1.1.5 动物分组与给药方法18
• 1.1.6 AD小鼠模型的基因型鉴定18-20
• 1.1.7 AD小鼠模型血清叶酸浓度测定20-21
• 1.1.8 AD小鼠模型Aβ 沉淀的检测21-22
• 1.1.9 AD小鼠模型Aβ1 40和Aβ1 42含量的检测22-24
• 1.1.10 统计分析24
• 1.2 结果24-28
• 1.2.1 AD小鼠模型基因型鉴定24-25
• 1.2.2 叶酸对AD小鼠模型体重的影响25-26
• 1.2.3 叶酸对AD小鼠模型血清叶酸浓度的影响26-27
• 1.2.4 叶酸对AD小鼠模型脑组织Aβ 沉积的影响27-28
• 1.2.5 叶酸对AD小鼠模型脑组织中Aβ1 40和Aβ1 42含量的影响28
• 1.3 讨论28-31
• 1.3.1 AD小鼠模型概述28-29
• 1.3.2 叶酸对AD小鼠模型体重和血清叶酸浓度的影响机制29-30
• 1.3.3 叶酸对AD小鼠模型Aβ 沉积的抑制作用30-31
• 1.3.4 叶酸对APP/PS1小鼠模型脑组织中Aβ1 42含量的抑制作用31
• 1.4 小结31-32
• 二、叶酸对AD小鼠模型Aβ 生成相关分泌酶的影响32-50
• 2.1 对象和方法32-41
• 2.1.1 实验动物32
• 2.1.2 主要试剂32
• 2.1.3 仪器设备32-33
• 2.1.4 溶液及其配置方法33-34
• 2.1.5.小鼠干预小鼠干预和实验分组同第一部分。34
• 2.1.6 Western Bolt检测APP裂解相关酶的蛋白表达34-38
• 2.1.7 RT-PCR检测APP裂解相关酶的mRNA表达38-41
• 2.1.8 统计分析41
• 2.2 结果41-46
• 2.2.1 叶酸对AD小鼠模型脑组织中APP的mRNA和蛋白表达的影响41-42
• 2.2.2 叶酸对AD小鼠模型脑组织中ADAM9、ADAM10的mRNA和蛋白表达的影响42-44
• 2.2.3 叶酸对AD小鼠模型脑组织中BACE1的mRNA和蛋白表达的影响44-45
• 2.2.4 叶酸对AD小鼠模型脑组织中PS1、NCT的mRNA和蛋白表达的影响45-46
• 2.3 讨论46-49
• 2.3.1 叶酸对AD小鼠模型脑组织中非Aβ 生成途径相关分泌酶的促进作用46-48
• 2.3.2 叶酸对AD小鼠模型脑组织中Aβ 生成途径相关分泌酶的抑制作用48-49
• 2.4 小结49-50
• 结论50-51
• 参考文献51-58
• 发表论文和参加科研情况说明58-60
• 综述 叶酸对AD小鼠模型淀粉样蛋白前体裂解酶的作用及其机制的研究60-69
• 综述参考文献65-69
• 致谢69

【共引文献】

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本文编号：327843