构建表达人FGF21的食品级乳酸乳球菌及其功能研究

发布时间：2021-07-13 00:10

　　成纤维细胞生长因子21（FGF21）是近些年来研究比较成熟的代谢调节剂之一,在糖尿病以及肥胖等代谢性疾病治疗的研究中已经展现出它的重要作用,因此,FGF21已经成为治疗代谢性疾病的潜在药物。然而,由于它本身的性质,即:（1）蛋白质激素;（2）体内半衰期很短,使得外源给予FGF21无法满足更加方便而且令其持久的发挥作用的愿望。我们课题组研究发现,运用乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）这一食品级细菌作为宿主菌表达人源FGF21,就可以满足方便且在体内持久发挥FGF21作用的愿望。传统细菌经过基因改良后,作为异源蛋白表达宿主时,常常用抗生素抗性基因做为筛选标记,这样就存在很大的生物转基因引起抗生素耐药潜在危机。因此,对食品级细菌做为表达系统的研究就显得尤为重要。材料与方法1.菌株选择乳Lactococcus lactis NZ3900,载体选择PNZ8149（LacF为筛选标记）,Gen Bank查询Human FGF21序列,全基因合成,经过亚克隆,双酶切与载体连接,电转化入LacF基因缺失的菌株NZ3900,Elliker板筛选阳性克隆,菌液PCR,测序鉴定。为检测蛋白在... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

全球范围肥胖现状

引言酸乳球菌为公认的食品级细菌，无致病性，抑制有害细菌繁殖的作用，因此被广泛应用球菌做药物承载系统的研究越来越成熟，具并且乳酸乳球菌的基因组已经获得，USP45 使得该蛋白序列在后期药物呈递系统研究中对乳酸乳球菌作为药物呈递系统的研究最多的 诱导的蛋白表达系统。课题中，我们选择 NICE 系统中的 NZ3900阴性菌相比较有较厚的细胞壁，因此，其重法[57-59]，NZ3900 也是 LacF 基因缺失的法生长，本课题中，表达载体选择 PNZ814900/PNZ8149 组合使得乳糖成为阳性菌株的筛中的诱导剂为食品防腐剂 Nisin，又使得该改造后的 PNZ8149 载体做一图谱，如图 2.

小心吸取上清至一个新的离心管中；苯酚、氯仿抽提液,充分振荡混匀，12000r/min 离心 5m清至一个新的离心管中；积预冷的无水乙醇(-20 度保存)以及 0.1 体积的 3mol/L置 20min，12000r/min 离心 5min；淀加入 1mL70%乙醇充分洗涤，12000r/min 离心 10mi 10min；dH2O，37 度放置 30min，使充分溶解。剩余菌液，保菌后-80℃保存；提取出来的质粒浓度测量结果克隆片段（716bps）琼脂糖凝胶分析：条带大小与预期


本文编号：3280929