高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法替代微生物检定法测定硫酸新霉素效价的研究

发布时间：2021-07-20 10:18

　　目的建立用于测定硫酸新霉素效价的高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法（HPLC-PAD）。方法建立并验证HPLC-PAD法,测定硫酸新霉素各主要组分含量及相关物质;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定硫酸新霉素杂质谱,结合组分活性研究确定了硫酸新霉素的主要活性组分;采用半制备液相色谱-蒸发光散射检测器串联制备硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波谱手段进行结构确证;采用质量平衡法测定二者的纯度;采用三剂量抗生素微生物检定法测定B、C精制品各自的效价值,推导公式计算出硫酸新霉素的量效转换系数,设计实验进行交互作用考察及实际样品的验证。结果建立的HPLC-PAD方法在分离能力及方法的稳定性上均优于《欧洲药典》（EP）方法,适用于硫酸新霉素各组分的准确定量及有关物质检查;在线膜抑制脱盐技术成功地去除了流动相中的三氟乙酸,对硫酸新霉素的杂质谱进行研究,结合活性研究结果,确定新霉素B和新霉素C为新霉素的主要活性组分;成功制备获得新霉素B、C精制品,通过实验和计算获得了硫酸新霉素的量效转换系数,并通过了验证。结论初步实现了仪器法对微生物生物检定法的替代,基本完成了多组分氨基糖苷类抗... 

【文章来源】：中国药学杂志. 2020,55(02)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

硫酸新霉素有关物质测定四电位检测电位积分图

由于新霉素B、新霉素C没有紫外吸收基团，无法采用常规的以紫外检测器为指导的制备液相，因此我们将ELSD检测器与制备液相组装搭建进行两个组分的制备。2.3.1 组分的制备及结构确证

采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定了新霉素的杂质谱，除新霉素B和新霉素C外，共有12个相关杂质。通过相对保留时间和质谱数据分别比对各杂质信息，可定位新霉胺(峰4)、核糖霉素(峰7)、巴龙霉素Ⅱ(峰10)、新霉素C(峰11)和新霉素B(峰13);通过一级二级质谱数据可推定峰3为巴龙霉胺、峰6为乙酰新霉胺、峰9为巴龙霉素I，峰14为乙酰新霉素B。峰1、峰2、峰5、峰8和峰12为未知杂质。通过对各已知组分及已知杂质的裂解规律比对，推定出12个杂质的结构;根据有关物质强制降解实验、稳定性实验相关资料及原料药中杂质的变化推测出各杂质可能来源，其中主要降解杂质为新霉胺，为新霉素B或新霉素C酸性降解杂质，其他杂质多为工艺杂质，杂质来源见表4。表4 图3中各峰LC-IT-TOF测定数据、推定结构及来源分析

【参考文献】：
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本文编号：3292638