熊果酸经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

发布时间：2021-07-30 20:17

　　目的:复制高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白（High ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤病理模型,证明熊果酸（UA）经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路保护血管内皮细胞。方法:以HUVECs为受试对象,筛选确定High ox-LDL的最佳造模浓度（24h）。实验设计为:正常组、High ox-LDL组、UA+High ox-LDL组、ROCK特异性抑制剂（Y27632）组、Y27632+High ox-LDL组、UA+Y27632+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性激活剂（罗格列酮）组、罗格列酮+High ox-LDL组、UA+罗格列酮+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性抑制剂（GW9662组）、GW9662+High ox-LDL组、UA+GW9662+High ox-LDL组。采用CCK8法检测各组细胞的存活率;应用分子生物学技术,检测不同处理组中ROCK磷酸化水平（p-ROCK/ROCK非磷酸化）以及PPAR-γ、CXCL16在m RNA和蛋白水平的表达,并运用特异性抑制剂/激活剂证明其级联关系;Amplite ROS Green... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料
    1.1 细胞株
    1.2 主要试剂和材料
    1.3 仪器设备
第二章 实验方法
    2.1 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的传代培养、冻存、复苏
        2.1.1 HUVECs的传代培养
        2.1.2 HUVECs的冻存、复苏
    2.2 高氧化程度的ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型
    2.3 CCK8法检测不同浓度的熊果酸对High ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤的保护作用
    2.4 CCK8法检测不同的抑制剂对HUVECs生存率的影响
    2.5 RT-PCR检测ROCK、PPAR-γ、CXCL16的m RNA水平的表达变化
    2.6 免疫印迹（Western Blot）
    2.7 细胞内ROS试剂盒检测不同给药组的ROS的表达变化
    2.8 细胞内ROS试剂盒检测不同抑制剂处理组ROS的表达变化
    2.9 计算机辅助药物软件（CADD）模拟UA与ROCK的空间分子对接情况
    2.10 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 不同浓度的High ox-LDL对细胞存活率的影响
    3.2 不同浓度的熊果酸对High ox-LDL诱导的氧化损伤的保护作用
    3.3 不同的抑制剂对细胞存活率的影响
    3.4 熊果酸对High ox-LDL损伤的HUVECs内ROCK、PPAR-γ、CXCL16在m RNA水平表达的影响
    3.5 熊果酸对High ox-LDL损伤的HUVECs内ROCK、PPAR-γ、CXCL16在蛋白水平表达的影响
    3.6 ROCK的特异性抑制剂Y27632对High ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型中的PPAR-γ、CXCL16表达的影响
    3.7 PPAR-γ的特异性激活剂罗格列酮、特异性抑制剂GW9662对High ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型中CXCL16表达的影响
    3.8 不同处理组ROS的表达变化
    3.9 CADD模拟的UA与ROCK的空间分子对接
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]人脐静脉内皮细胞的研究和应用[J]. 王刚,张凯伦.  医学综述. 2011(07)
[2]Rho/ROCK信号通路参与晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞骨架结构改变[J]. 王吉萍,郭晓华,王陵军,李强,陈波,吴炜,黄绪亮,黄巧冰.  生理学报. 2009(02)



本文编号：3312059