级联靶向光热纳米载药系统的构建及增强免疫治疗疗效的研究

发布时间：2021-08-04 08:25

　　目的:应用细胞学、药理学、分子生物学等体内外实验研究光热治疗、PD-1抗体药物治疗以及光热治疗协同PD-1抗体治疗小鼠肝癌的治疗效果;构建级联双重靶向脂质体,研究光热治疗对PD-1结合位点PD-L1表达的影响,探究光热治疗协同PD-1抗体治疗的及机制。方法:1.构建H22肝癌balb/c荷瘤鼠模型,平行分组,设置空白组、光热治疗组、手术组对小鼠肿瘤进行治疗。利用流式细胞分析术、免疫荧光分析小鼠肿瘤组织内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况。2.利用免疫印记分析、Q-PCR、免疫组化分析在不同治疗后,体外肿瘤细胞以及小鼠肿瘤组织内PD-L1表达情况,以及IFN-γ表达情况。3.利用流式分析术,分析小鼠肿瘤微环境内CD38表达对T细胞杀伤毒性的评价。4.构建级联双重靶向肿瘤微环境响应热敏脂质体载药系统,对级联双重靶向肿瘤微环境响应热敏脂质体载药系统进行表征。5.对H22荷瘤鼠进行分组治疗,记录分析小鼠肿瘤体积变化、小鼠存活率、脏器毒性情况。6.对4T1荷瘤鼠进行分组治疗,记录分析小鼠肿瘤体积变化、小鼠存活率、肺转移情况。结果:1.通过流式细胞分析术、免疫荧光实验结果表明,与空白对照组、手... 

【文章来源】：长春中医药大学吉林省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－４不同细胞系ＰＤ－Ｌ１的ｍＲＮＡ转录水平??（利用Ｔ检验检测，与对照组比较，＊ｐ＜０．０５）??

０．２．０－?；?＊?１?＊?Ｉ??ｉｌｌｉｌｌＭ??图１－４不同细胞系ＰＤ－Ｌ１的ｍＲＮＡ转录水平??（利用Ｔ检验检测，与对照组比较，＊ｐ＜０．０５）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?Ｔｈｅ?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?Ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌ１?ｉｎ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ??（Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐ，＊?Ｐ?＜?０．０５?ｂｙ?Ｔ?ｔｅｓｔ）??此外，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ对不同细胞系的两个实验组考察了?ＰＤ－Ｌｌ蛋白的表达水平，??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验与Ｑ－ＰＣＲ结果一致，如图１－５所示。结果证明，温度升高确实能增加肿??瘤细胞中ＰＤ－Ｌ１的表达。可提高免疫检查点抑制剂治疗的疗效。??４Ｔ１?ＨｅｐＧ２?ＭＣＦ７?Ｕ８７?Ａ５４９??ＰＤ－Ｌｌ?—??＿＿＿＿＿＿?ｍ??ＧＡＤＰＨ?卜一擊？??Ｗａｔｅｒ－Ｂａｔｈ?－?＋?－?＋?－?＋?－?＋?－?＋??图１－５不同细胞系ＰＤ－Ｌｌ的蛋白表达水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌｌ?ｉｎ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ??接下来，研究了不同时间对ＰＴＴ后肿瘤组织中ＰＤ－Ｌｌ表达的影响。实验结果表明，??ＰＴＴ可以提高肿瘤组织中ＰＤ－Ｌ１的表达水平。对注射有双侧Ｈ２２肿瘤细胞的小鼠进行分??组治疗。治疗一层，考察另一侧。根据Ｑ－ＰＣＲ实验结果，接种后第１０天ＴＯ－Ｌ１的ｍＲＮＡ??转录水平较其他组下降２＿６倍。并且，ＰＤ－Ｌｌ在第５天的转录水平高于第１０天，手术治疗??的两组中也有同样的现象

利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验和免疫组化实验考察不同治疗组ＰＤ－Ｌｌ在肿瘤组织的??表达。结果表明，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验和免疫组化实验均与Ｑ－ＰＣＲ实验结果一致。这些结??果证实ＰＤ－Ｌ１的表达与治疗后的时间相关。如图１－７及图１－８所示。??ＰＤ－Ｌｌ??ＧＡＤＰＨ??５－Ｃ?５－Ｐ?５－Ｓ?１０－Ｃ?１０－Ｐ１０－Ｃ??图１－７不同治疗组肿瘤组织ＰＤ－Ｌｌ的蛋白表达水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１－７?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰＤ－Ｌｌ?ｉｎ?Ｔｕｍｏｒ?Ｔｉｓｓｕｅｓ?ｏｆ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?Ｇｒｏｕｐｓ??２０??


本文编号：3321364