人源化抗ROR1抗体及其AGAP偶联物对卵巢癌生物学特性的影响

发布时间：2021-08-12 08:53

　　目的:制备酪氨酸激酶样孤儿受体1（tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1）的全分子抗体（ROR1-IgG1）及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP）,检测ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法:以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO-S）,收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术（fluorescence-activated cell sorting,FACS）等评估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫学活性。通过CCK-8法、划痕实验、Tr... 

【文章来源】：南京医科大学学报(自然科学版). 2020,40(03)北大核心CSCD

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【部分图文】：

ELISA检测IgG1-AGAP和ROR1-IgG1与抗原的结合活性

采用流式细胞术检测IgG1-AGAP和ROR1-IgG1对细胞选择性结合的活性。结果显示：分别用IgG1-AGAP或ROR1-IgG1处理HO8910和IOSE386细胞，在HO8910中检测到的平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）值远高于IOSE386细胞（IgG1-AGAP组：58.00%vs.0.63%;ROR1-IgG1组：61.00%vs.0.91%,P<0.05），显示IgG1-AGAP或ROR1-IgG1可特异性结合到高表达ROR1蛋白的HO8910细胞，而不与几乎不表达ROR1蛋白的IOSE386细胞结合（图6）。2.4 体外评估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用

通过划痕实验来检测IgG1-AGAP和ROR1-IgG1对HO8910细胞和IOSE386细胞迁移的影响。如图8所示：HO8910细胞中，IgG1-AGAP组24 h、48 h的迁移率分别为24.0%和31.7%;ROR1-IgG1组24 h、48 h的迁移率分别为32.3%和50.2%;PBS组24 h、48 h的迁移率分别为38.4%和75.2%。与PBS组相比，暴露于32μg/mL ROR1-IgG1或IgG1-AGAP中48 h，显著抑制了HO8910细胞划痕区域的闭合，其中IgG1-AGAP处理组24、48 h的愈合率均低于ROR1-IgG1处理组，且两组差异有统计学意义（P<0.05）。而在IOSE386细胞，不同时间段细胞的迁移率差异没有统计学意义（P>0.05）。2.4.3 Transwell侵袭实验

【参考文献】：
期刊论文
[1]全人源抗Trop-2 IgG的制备及对卵巢癌细胞生物特性的影响[J]. 刘金荣,白璐月,唐奇,王一荃,叶春萍,殷郑娜,朱进,冯振卿,童华,张慧林.  南京医科大学学报(自然科学版). 2016(03)



本文编号：3338015