HPLC同时测定复方氨基酸注射液中3个氨基酸的含量

发布时间：2021-08-13 08:01

　　目的:建立HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量。方法:采用Waters Symmetry^?C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为8 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇（9∶1）,检测波长280 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃。结果:3个氨基酸可完全分离,色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的线性范围分别为12.15～242.96、4.06～81.13、12.36～247.20μg·mL^-1（r均为0.999 9）,回收率分别为98.0%、99.4%、102.0%（n=9）。7家企业生产的复方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量分别为88.7%～113.8%、89.4%～103.1%、89.9%～101.3%,结果均合格。结论:所用方法可同时测定复方氨基酸注射液中3个氨基酸含量,并为现行标准的提高提供可靠依据。 

【文章来源】：药物分析杂志. 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

空白溶液（a）、混合对照品溶液A(b）、混合对照品溶液B(c）、小儿19AA-Ⅰ样品溶液（d）、小儿18AA-Ⅱ样品溶液（e）和小儿18AA-Ⅰ样品溶液（f）的色谱图

曾考察不同色谱柱和流动相系统下3个氨基酸的的分离度，采用20 mmol·L-1磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH 2.5）-乙腈（9∶1）为流动相[18]及色谱柱为Thermo C18时，乙酰酪氨酸和色氨酸不能分离；参照《中华人民共和国药典》复方氨基酸注射液（18AA-Ⅵ）下酪氨酸与N-乙酰-L-色氨酸的含量测定方法，采用8 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇（9∶1）为流动相[19]及Thermo C18色谱柱，乙酰酪氨酸和色氨酸分离度R为1.57；而采用8 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇（9∶1）为流动相及Waters Symmetry?C18柱时，乙酰酪氨酸和色氨酸分离度大大改善（图1）。因此，选择了本文的色谱条件。3.2 样品测定

本文方法测定结果与法定标准测定结果的比较（图3）表明：色氨酸结果基本一致；乙酰酪氨酸B公司和C公司的法定标准检测结果偏低，分析原因应是B、C公司参考的同一法定标准[2]，乙酰酪氨酸含量采用水解后用氨基酸分析仪测定，而其他公司则用HPLC法[3]，水解后氨基酸分析仪测定浓度低于HPLC法，可能是水解过程中乙酰酪氨酸有部分损失；酪氨酸的法定标准检测结果偏高，分析原因应是现行标准中酪氨酸的检测方法为UV双波长法，其处方组成酪氨酸1.4 g·L-1是以酪氨酸0.4 g·L-1和乙酰酪氨酸1.2 g·L-1的方式投料，而检测时对照品用的是酪氨酸，相当于把乙酰酪氨酸的校正因子当作1计算总酪氨酸的量，但实际测定乙酰酪氨酸的校正因子为1.16，该方法没有考虑酪氨酸和乙酰酪氨酸响应差异，导致检测结果偏高。以上也说明了法定标准中存在问题的方法应及时修订。本文拟定方法专属性强、结果准确、操作简便，可为小儿复方氨基酸注射液含量测定的标准提高提供依据。

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3340056