微生物转化法制备雄甾-4-烯-3,17-二酮羟化产物的研究
发布时间：2021-08-15 11:33
微生物转化甾体化合物的反应具有污染小、高效、专一性强的优点,其中羟化反应是最重要的反应。雄甾-4-烯-3,17-二酮（1,简称雄烯二酮或4-AD）是合成利尿剂、避孕药、雄激素等甾体药物的重要中间体,其中通过微生物转化法生成的11α-羟基雄烯二酮（11α-OH-4-AD）是合成治疗心血管疾病的药物依普利酮的关键中间体。微生物转化法获得11α-OH-4-AD不仅是半化学合成相应甾体药物的首要攻克目标,而且也是半合成过程中的最关键步骤之一。本论文以4-AD为底物进行了菌种的筛选和转化工艺的优化,以期得到具有一定工业应用价值的菌种。另外,本论文还研究了泡盛曲霉对雄二烯二酮（ADD）的转化过程。详细的研究内容如下:1.从全国不同地方采集的15种土样中获得3株对4-AD有较强转化能力的菌株,分别编号为MH-14、MH-18、MH-19。其中MH-18能够转化4-AD得到11α-OH-4-AD,其基础收率为48.50%,通过形态学观察和菌株分子生物学方面的基因序列比对,最终确定该菌株为泡盛曲霉（Aspergillus awamori）。2.研究了泡盛曲霉（Aspergillus awamori）对甾...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甾体化合物的基本结构
第一章 前言为仅次于抗生素的第二大类药物[7]。体化合物的简介物的生理活性很强且治疗适应症在现有甾体药物的改造以及发现新的内或胞外酶作为生物催化剂将底物见下图：
2.2.2 复筛据文献报道，底物 4-AD 的 Rf 值为 0.68 左右，11α-OH-4-AD 的 Rf 值为 0.42左右。将初筛得到的一系列菌株进行复筛，TLC 检测结果发现有 3 株菌对 4-AD有较好的转化能力，分别为 MH-14、MH-18 和 MH-19，其余菌株对 4-AD 的转化率均不及 30%，且 MH-18 菌株很可能将 4-AD 转化为依普利酮合成过程中所需要的重要中间体 11α-OH-4-AD，同时其对底物 4-AD 的基础转化率也比较高，由此确定 MH-18 有进一步进行生物转化工艺研究的价值。2.2.3 菌种鉴定由于 11α-OH-4-AD 是合成选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮的重要中间体，所以本实验从菌株的形态学和分子生物学两方面进行 MH-18 种属的鉴定。其中，菌种 MH-14、MH-18、MH-19 在固体平板培养基上的生长形态分别如下图所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hydroxylation and sulfation of sex steroid hormones in inflammatory liver[J]. Sang R.Lee,Seung-yeon Lee,Sang-yun Kim,Si-yun Ryu,Bae-kuen Park,Eui-Ju Hong. The Journal of Biomedical Research. 2017(05)
[2]5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较[J]. 李焕宇,付婷婷,张云,吕天佑,李远,徐秉良. 中国农学通报. 2017(16)
[3]超临界流体萃取红豆杉枝叶紫杉烷类萃余物中紫杉黄酮及单体组分的工艺优化[J]. 李兆慧,严柳叶,喻晓雁,阮晓,刘本,王强. 中药材. 2016(09)
[4]甾体类药物的研究现状与进展[J]. 姚韧辉. 科技风. 2016(18)
[5]黑曲霉催化雄甾-4-烯-3,17-二酮16β-羟基化[J]. 葛枳江,毛淑红,李宴清,刘晓光,路福平. 生物工程学报. 2014(09)
[6]雄甾-4-烯-3,17-双酮转化菌株的筛选及转化产物的鉴定[J]. 冷潇,杨淑霞,李卫天,葛芳兰,李维,王衍堂. 成都医学院学报. 2014(04)
[7]微生物转化技术在中药研究中的应用[J]. 牛红军,王芃,杨官娥. 中国实验方剂学杂志. 2013(18)
[8]黑根霉RN-M246催化雄甾-4-烯-3,17-二酮的11α-羟基化反应[J]. 胡曦予,崔励,冯魁. 大连工业大学学报. 2013(04)
[9]甾体生物转化技术研究的现状与进展[J]. 许正宏,吴燕,李会,李恒,史劲松. 生物加工过程. 2013(02)
[10]微生物转化在天然产物研究中的应用[J]. 刘庆鑫,李慧梁,柳润辉. 药学实践杂志. 2012(05)
博士论文
[1]具有抗肿瘤活性薯蓣皂素衍生物的合成及作用机制的研究[D]. 王博.沈阳药科大学 2012
[2]雄甾-4-烯-3，17-二酮的11α羟化及人参皂苷Rd微生物转化研究[D]. 叶丽.复旦大学 2010
[3]甾体化合物微生物转化的研究[D]. 林彦良.山东大学 2009
硕士论文
[1]甾体化合物羟基化菌种的筛选及产物鉴定[D]. 李宴清.天津科技大学 2014
[2]固定化黑根霉进行甾体C11α羟基化的研究[D]. 王森.浙江工业大学 2012
[3]雄甾-4-烯-3，17-二酮的微生物转化研究[D]. 胡曦予.大连工业大学 2012
[4]微生物转化法制备雄二烯二酮条件优化的研究[D]. 汪静.四川师范大学 2012
[5]去氢表雄酮的生物法羟基化修饰研究[D]. 刘佩卉.山东轻工业学院 2010
[6]黑根霉甾体11α-羟基化发酵工艺与细胞动力学的初步研究[D]. 周浩力.天津大学 2007
[7]微生物转化法在药物芳环羟基化代谢研究中的应用[D]. 崔洪霞.沈阳药科大学 2001
本文编号：3344472
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甾体化合物的基本结构
第一章 前言为仅次于抗生素的第二大类药物[7]。体化合物的简介物的生理活性很强且治疗适应症在现有甾体药物的改造以及发现新的内或胞外酶作为生物催化剂将底物见下图：
2.2.2 复筛据文献报道，底物 4-AD 的 Rf 值为 0.68 左右，11α-OH-4-AD 的 Rf 值为 0.42左右。将初筛得到的一系列菌株进行复筛，TLC 检测结果发现有 3 株菌对 4-AD有较好的转化能力，分别为 MH-14、MH-18 和 MH-19，其余菌株对 4-AD 的转化率均不及 30%，且 MH-18 菌株很可能将 4-AD 转化为依普利酮合成过程中所需要的重要中间体 11α-OH-4-AD，同时其对底物 4-AD 的基础转化率也比较高，由此确定 MH-18 有进一步进行生物转化工艺研究的价值。2.2.3 菌种鉴定由于 11α-OH-4-AD 是合成选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮的重要中间体，所以本实验从菌株的形态学和分子生物学两方面进行 MH-18 种属的鉴定。其中，菌种 MH-14、MH-18、MH-19 在固体平板培养基上的生长形态分别如下图所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hydroxylation and sulfation of sex steroid hormones in inflammatory liver[J]. Sang R.Lee,Seung-yeon Lee,Sang-yun Kim,Si-yun Ryu,Bae-kuen Park,Eui-Ju Hong. The Journal of Biomedical Research. 2017(05)
[2]5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较[J]. 李焕宇,付婷婷,张云,吕天佑,李远,徐秉良. 中国农学通报. 2017(16)
[3]超临界流体萃取红豆杉枝叶紫杉烷类萃余物中紫杉黄酮及单体组分的工艺优化[J]. 李兆慧,严柳叶,喻晓雁,阮晓,刘本,王强. 中药材. 2016(09)
[4]甾体类药物的研究现状与进展[J]. 姚韧辉. 科技风. 2016(18)
[5]黑曲霉催化雄甾-4-烯-3,17-二酮16β-羟基化[J]. 葛枳江,毛淑红,李宴清,刘晓光,路福平. 生物工程学报. 2014(09)
[6]雄甾-4-烯-3,17-双酮转化菌株的筛选及转化产物的鉴定[J]. 冷潇,杨淑霞,李卫天,葛芳兰,李维,王衍堂. 成都医学院学报. 2014(04)
[7]微生物转化技术在中药研究中的应用[J]. 牛红军,王芃,杨官娥. 中国实验方剂学杂志. 2013(18)
[8]黑根霉RN-M246催化雄甾-4-烯-3,17-二酮的11α-羟基化反应[J]. 胡曦予,崔励,冯魁. 大连工业大学学报. 2013(04)
[9]甾体生物转化技术研究的现状与进展[J]. 许正宏,吴燕,李会,李恒,史劲松. 生物加工过程. 2013(02)
[10]微生物转化在天然产物研究中的应用[J]. 刘庆鑫,李慧梁,柳润辉. 药学实践杂志. 2012(05)
博士论文
[1]具有抗肿瘤活性薯蓣皂素衍生物的合成及作用机制的研究[D]. 王博.沈阳药科大学 2012
[2]雄甾-4-烯-3，17-二酮的11α羟化及人参皂苷Rd微生物转化研究[D]. 叶丽.复旦大学 2010
[3]甾体化合物微生物转化的研究[D]. 林彦良.山东大学 2009
硕士论文
[1]甾体化合物羟基化菌种的筛选及产物鉴定[D]. 李宴清.天津科技大学 2014
[2]固定化黑根霉进行甾体C11α羟基化的研究[D]. 王森.浙江工业大学 2012
[3]雄甾-4-烯-3，17-二酮的微生物转化研究[D]. 胡曦予.大连工业大学 2012
[4]微生物转化法制备雄二烯二酮条件优化的研究[D]. 汪静.四川师范大学 2012
[5]去氢表雄酮的生物法羟基化修饰研究[D]. 刘佩卉.山东轻工业学院 2010
[6]黑根霉甾体11α-羟基化发酵工艺与细胞动力学的初步研究[D]. 周浩力.天津大学 2007
[7]微生物转化法在药物芳环羟基化代谢研究中的应用[D]. 崔洪霞.沈阳药科大学 2001
本文编号：3344472
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