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双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

发布时间:2021-08-24 20:05
  目的探讨双氢睾酮(DHT)对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。方法从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体(FSHR)细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组(无药物干预)、10-8mol/L DHT组、10-5mol/L DHT组,2×10-5mol/L蛋白激酶B(Akt)抑制剂(MK-2206 2Hcl)组和10-8mol/L DHT+2×10-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化; Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93. 33%±3. 09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8mol/L DHT和10-5mol/L DHT... 

【文章来源】:解剖学报. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章页数】:6 页

【部分图文】:

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响


DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响

蛋白,信号通路,雄激素,卵泡


图5 DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响本研究发现,DHT处理细胞后,p-Akt升高,这与Narkwichean等[4]指出雄激素可以使p-Akt升高研究结果一致。又有研究指出,p-Akt升高后AMH表达升高[6],结合本实验结果,更进一步证明了DHT上调AMH表达的作用。不仅如此,DHT处理细胞后使得p-Akt升高,推测DHT可能可以激活大鼠原代卵泡颗粒细胞内的Akt信号通路。Akt是雄激素调控卵巢卵泡生长发育的重要信号通路,有研究指出,雄激素不仅可以通过非基因转录途径促进Akt的磷酸化,还可以通过由雄激素受体介导的基因转录途径激活Akt信号通路,从而调控卵泡细胞和颗粒细胞的生长发育[9,15]。有研究指出,Akt信号通路的激活不仅会推动颗粒细胞的增殖与分化,还会导致大量原始卵泡启动发育[16~18]。结合本研究得到的结果DHT可能可以激活Akt信号通路,推测DHT可能通过激活Akt信号通路从而调控原始卵泡的生长发育。但是本实验只能初步得出DHT可能是Akt信号通路的激活因子,DHT具体如何影响Akt信号通路,还需要更多的实验加以验证。

卵泡,原代培养,颗粒,细胞


本研究发现,体外培养的大鼠颗粒细胞可以达到较高的纯度并能良好地生长。使用DHT干预体外培养的大鼠颗粒细胞,能明显增加AMH的表达。在卵巢中,原始卵泡启动发育为初级卵泡后,AMH开始在颗粒细胞上表达,并随着卵泡的生长发育其表达逐渐增加,在窦前卵泡和小的窦状卵泡上表达最多,其后表达降低[4,12]。AMH作用是抑制原始卵泡的启动生长、降低卵泡对FSH的反应性,是卵巢储备能力的1个指标[14]。DHT可以增加颗粒细胞AMH的表达,推测雄激素能通过增加卵巢内AMH的水平,减少每个周期所募集启动的原始卵泡,有利于维持原始卵泡的数量。Laird等[9]指出,雄激素可以促进初级卵泡的生长发育,此外,Yang等[14]研究发现,体外培养添加AMH可以抑制原始卵泡的启动激活,结合本研究结果,我们推测,雄激素在促进生长卵泡发育的同时,也作用于生长卵泡中的颗粒细胞,使其合成AMH。当AMH达到一定水平时,会抑制原始卵泡启动激活,从而减少原始卵泡消耗。Zhang等[8]研究表明,雄激素能够通过上调AMH,血管内皮生长因子(vescular endotherial growth factor,VEGF)和低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)的表达水平来调节颗粒细胞的功能,这与本研究得到的结果一致。因此,雄激素增加颗粒细胞AMH的表达,可能对于维持女性生育力的储备具有积极作用。图2 HE染色观察大鼠原代卵泡颗粒细胞形态,白色箭头示细胞核

【参考文献】:
期刊论文
[1]转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达[J]. 袁丽娟,任君旭,姬宏宇,张静,张娟,丁艳.  解剖学报. 2018(01)



本文编号:3360637

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