双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响
发布时间：2021-08-24 20:05
目的探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10-8mol/L DHT组、10-5mol/L DHT组,2×10-5mol/L蛋白激酶B（Akt）抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10-8mol/L DHT+2×10-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化; Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93. 33%±3. 09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8mol/L DHT和10-5mol/L DHT...
【文章来源】：解剖学报. 2020,51(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响
图5 DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响本研究发现，DHT处理细胞后，p-Akt升高，这与Narkwichean等[4]指出雄激素可以使p-Akt升高研究结果一致。又有研究指出，p-Akt升高后AMH表达升高[6]，结合本实验结果，更进一步证明了DHT上调AMH表达的作用。不仅如此，DHT处理细胞后使得p-Akt升高，推测DHT可能可以激活大鼠原代卵泡颗粒细胞内的Akt信号通路。Akt是雄激素调控卵巢卵泡生长发育的重要信号通路，有研究指出，雄激素不仅可以通过非基因转录途径促进Akt的磷酸化，还可以通过由雄激素受体介导的基因转录途径激活Akt信号通路，从而调控卵泡细胞和颗粒细胞的生长发育[9,15]。有研究指出，Akt信号通路的激活不仅会推动颗粒细胞的增殖与分化，还会导致大量原始卵泡启动发育[16～18]。结合本研究得到的结果DHT可能可以激活Akt信号通路，推测DHT可能通过激活Akt信号通路从而调控原始卵泡的生长发育。但是本实验只能初步得出DHT可能是Akt信号通路的激活因子，DHT具体如何影响Akt信号通路，还需要更多的实验加以验证。
本研究发现，体外培养的大鼠颗粒细胞可以达到较高的纯度并能良好地生长。使用DHT干预体外培养的大鼠颗粒细胞，能明显增加AMH的表达。在卵巢中，原始卵泡启动发育为初级卵泡后，AMH开始在颗粒细胞上表达，并随着卵泡的生长发育其表达逐渐增加，在窦前卵泡和小的窦状卵泡上表达最多，其后表达降低[4,12]。AMH作用是抑制原始卵泡的启动生长、降低卵泡对FSH的反应性，是卵巢储备能力的1个指标[14]。DHT可以增加颗粒细胞AMH的表达，推测雄激素能通过增加卵巢内AMH的水平，减少每个周期所募集启动的原始卵泡，有利于维持原始卵泡的数量。Laird等[9]指出，雄激素可以促进初级卵泡的生长发育，此外，Yang等[14]研究发现，体外培养添加AMH可以抑制原始卵泡的启动激活，结合本研究结果，我们推测，雄激素在促进生长卵泡发育的同时，也作用于生长卵泡中的颗粒细胞，使其合成AMH。当AMH达到一定水平时，会抑制原始卵泡启动激活，从而减少原始卵泡消耗。Zhang等[8]研究表明，雄激素能够通过上调AMH，血管内皮生长因子(vescular endotherial growth factor,VEGF)和低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)的表达水平来调节颗粒细胞的功能，这与本研究得到的结果一致。因此，雄激素增加颗粒细胞AMH的表达，可能对于维持女性生育力的储备具有积极作用。图2 HE染色观察大鼠原代卵泡颗粒细胞形态，白色箭头示细胞核
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达[J]. 袁丽娟,任君旭,姬宏宇,张静,张娟,丁艳. 解剖学报. 2018(01)
本文编号：3360637
【文章来源】：解剖学报. 2020,51(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响
图5 DHT体外干预大鼠原代卵泡颗粒细胞后对AMH蛋白表达的影响本研究发现，DHT处理细胞后，p-Akt升高，这与Narkwichean等[4]指出雄激素可以使p-Akt升高研究结果一致。又有研究指出，p-Akt升高后AMH表达升高[6]，结合本实验结果，更进一步证明了DHT上调AMH表达的作用。不仅如此，DHT处理细胞后使得p-Akt升高，推测DHT可能可以激活大鼠原代卵泡颗粒细胞内的Akt信号通路。Akt是雄激素调控卵巢卵泡生长发育的重要信号通路，有研究指出，雄激素不仅可以通过非基因转录途径促进Akt的磷酸化，还可以通过由雄激素受体介导的基因转录途径激活Akt信号通路，从而调控卵泡细胞和颗粒细胞的生长发育[9,15]。有研究指出，Akt信号通路的激活不仅会推动颗粒细胞的增殖与分化，还会导致大量原始卵泡启动发育[16～18]。结合本研究得到的结果DHT可能可以激活Akt信号通路，推测DHT可能通过激活Akt信号通路从而调控原始卵泡的生长发育。但是本实验只能初步得出DHT可能是Akt信号通路的激活因子，DHT具体如何影响Akt信号通路，还需要更多的实验加以验证。
本研究发现，体外培养的大鼠颗粒细胞可以达到较高的纯度并能良好地生长。使用DHT干预体外培养的大鼠颗粒细胞，能明显增加AMH的表达。在卵巢中，原始卵泡启动发育为初级卵泡后，AMH开始在颗粒细胞上表达，并随着卵泡的生长发育其表达逐渐增加，在窦前卵泡和小的窦状卵泡上表达最多，其后表达降低[4,12]。AMH作用是抑制原始卵泡的启动生长、降低卵泡对FSH的反应性，是卵巢储备能力的1个指标[14]。DHT可以增加颗粒细胞AMH的表达，推测雄激素能通过增加卵巢内AMH的水平，减少每个周期所募集启动的原始卵泡，有利于维持原始卵泡的数量。Laird等[9]指出，雄激素可以促进初级卵泡的生长发育，此外，Yang等[14]研究发现，体外培养添加AMH可以抑制原始卵泡的启动激活，结合本研究结果，我们推测，雄激素在促进生长卵泡发育的同时，也作用于生长卵泡中的颗粒细胞，使其合成AMH。当AMH达到一定水平时，会抑制原始卵泡启动激活，从而减少原始卵泡消耗。Zhang等[8]研究表明，雄激素能够通过上调AMH，血管内皮生长因子(vescular endotherial growth factor,VEGF)和低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)的表达水平来调节颗粒细胞的功能，这与本研究得到的结果一致。因此，雄激素增加颗粒细胞AMH的表达，可能对于维持女性生育力的储备具有积极作用。图2 HE染色观察大鼠原代卵泡颗粒细胞形态，白色箭头示细胞核
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达[J]. 袁丽娟,任君旭,姬宏宇,张静,张娟,丁艳. 解剖学报. 2018(01)
本文编号：3360637
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