基于Nanobody的靶向药物递送系统的研究

发布时间：2021-08-30 06:40

　　癌症是一种基因病,是严重威胁人类安全的一类恶性疾病。癌症是恶性的肿瘤的一种,目前临床上对恶性肿瘤的治疗手段仍是以药物治疗为主。本文简述了纳米抗体（nanobody）的结构功能特性,描述了具有主动靶向功能的纳米抗体-药物偶联物以及主动靶向的纳米诊疗体系的设计与功能验证。对nanobody目前的研究现状,包括产生、结构特点、应用优势等进行了综述。本文描述了两种基于nanobody的靶向药物运输体系,在借助nanobody的靶向性的同时,进一步发挥其易于修饰,稳定性高,渗透性高的特点。文中创新性地采用廉价易得,高效温和的TG酶对nanobody进行定点PEG化,将PEG化和药物偶联结合,更好地发挥抗体靶向药物体系肿瘤抑制的功效。本文涉及的实验工作主要包括两个章节:第二章:对nanobody进行分子克隆改造,在其C-terminal加入可修饰标签。设计制备nanobody-Pt（IV）偶联体系,为了增加体系的稳定性,对nanobody进行了 PEG化。由于nanobody的分子量较小,PEG化后仍易被机体清除。通过固相合成技术,合成带有PEG链的树枝状聚赖氨酸（PEG-DPK）作为底物,制备了... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第1章 绪论
    1.1 纳米抗体的特性与优势
        1.1.1 纳米抗体的发现与制备
        1.1.2 纳米抗体的结构特点
        1.1.3 纳米抗体与单克隆抗体性质的比较
    1.2 纳米抗体的应用
        1.2.1 纳米抗体药物偶联物
        1.2.2 纳米抗体修饰的纳米药物运输体系
        1.2.3 纳米抗体药物
        1.2.4 纳米抗体与免疫治疗
        1.2.5 纳米抗体在肿瘤诊断中的应用
        1.2.6 纳米抗体在其他领域的应用
    1.3 抗体的PEG化修饰
第2章 纳米抗体-铂偶联体系用于肿瘤靶向治疗
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 主要实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 纳米抗体的改造与表达、纯化
        2.3.2 树枝状聚赖氨酸的合成及PEG修饰
        2.3.3 纳米抗体的PEG化及提纯
        2.3.4 马来酰亚胺基铂的合成表征
        2.3.5 纳米抗体铂的制备与表征
        2.3.6 纳米抗体铂的稳定性验证
        2.3.7 纳米抗体铂与DNA的反应
        2.3.8 纳米抗体铂的细胞结合和内在化
        2.3.9 纳米抗体铂的多细胞球渗透性
        2.3.10 纳米抗体铂的细胞摄取
        2.3.11 纳米抗体铂的细胞毒性测定
        2.3.12 纳米抗体铂的药代动力学研究
        2.3.13 纳米抗体铂的组织分布
        2.3.14 纳米抗体铂的组织渗透
        2.3.15 肿瘤的生长抑制
        2.3.16 免疫组化分析
        2.3.17 治疗后Western blot分析
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 纳米抗体铂的制备与表征
        2.4.2 纳米抗体铂的体外稳定性
        2.4.3 纳米抗体铂与DNA的结合
        2.4.4 纳米抗体铂的特异性结合与内在化
        2.4.5 纳米抗体铂的体外穿透性验证
        2.4.6 纳米抗体铂的细胞摄取与细胞毒性
        2.4.7 纳米抗体铂的药代动力学研究
        2.4.8 纳米抗体铂的肿瘤组织渗透性
        2.4.9 纳米抗体铂的肿瘤抑制效果
        2.4.10 纳米抗体铂的系统毒性
        2.4.11 纳米抗体铂对肿瘤EGFR水平干扰
        2.4.12 纳米抗体铂在小鼠主要器官中的积累
    2.5 本章小结
第3章 纳米抗体修饰的上转换荧光诊疗体系
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 主要试剂及材料
        3.2.2 细胞株
    3.3 实验方法
        3.3.1 上转换颗粒的合成制备
        3.3.2 HSA包裹上转换颗粒的制备
        3.3.3 Nb_((PEG))/DOX/H SA-UCNPs的制备
        3.3.4 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs形貌表征与粒径分布
        3.3.5 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs对阿霉素的负载及释放
        3.3.6 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs特异性细胞摄取
        3.3.7 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的上转换荧光检测
        3.3.8 细胞毒性检测
    3.4 实验结果及讨论
        3.4.1 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的制备与表征
        3.4.2 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的上转换荧光检测
        3.4.3 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的药物释放
        3.4.4 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs颗粒的体外稳定性
        3.4.5 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的细胞选择性摄取
        3.4.6 Nb_((PEG))/DOX/HSA-UCNPs的细胞毒性
    3.5 本章小结
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果



本文编号：3372272