氘代替代物结合UPLC-MS/MS同步检测去卵巢大鼠血浆中22种内源性大麻素
发布时间：2021-09-23 19:37
该文旨在建立一种超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）同步检测去卵巢大鼠血浆中22种内源性大麻素类物质的新方法。首先血浆样品经固相小柱（SPE柱）萃取,然后利用UPLC-MS/MS进行检测。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1%乙酸溶液为流动相A,乙腈-异丙醇（9∶1）溶液为流动相B,进行梯度洗脱,采用正离子多反应离子监测模式,以氘代试剂作为对照品的替代物计算回收率,同步定量22种内源性大麻素。其中,22种内源性大麻素类物质的线性相关系数均大于0.99,定量限（LOQs）为0.089 61.965 2 nmol·L-1;5个氘代替代物的相对回收率为11.40%129.9%;重复性考察结果显示,RSD均小于8.0%。所建立的方法,可以用于去卵巢大鼠血浆样品中PGF2αEA,AEA等多种内源性大麻素类物质的定性与定量分析,验证了该方法的可行性及实用性。总之,该方法灵敏度高、重复性好、实用性强,可以用于大鼠血浆样品脂质代谢组学研究。
【文章来源】：中国中药杂志. 2016,41(21)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)的化学结构
2016年11月第41卷第21期Vol.41，No.21November，2016图222种内源性大麻素、5种氘代替代物及1种内标的提取离子色谱图Fig.2MＲMchromatogramsofthe22eCBs，5deuteratedsurrogatescompoundsand1IS之比来考察回收率，结果显示，除d8-NA-Gly与d4-PEA回收率较低外，其他氘代替代物回收率都在80%以上，结果见表2。3.4方法的应用用上述方法定性定量分析了去卵巢组、假手术组、阳性给药组、七宝美髯方给药组(低、中、高剂量组)大鼠血浆中的内源性大麻素类代谢产物。各组中22种内源性大麻素类的含量结果见图3。在对内源性大麻素类物质定量分析的基础上，采用SIMCA-P12.0软件，对所测样品数据进行主成分分析(PCA)与偏最小二乘判别(PLS-DA)分析，见图4。试验结果表明，共定性检测到PGF2aEA，PGF2a1G，αLEA，DHEA，AEA，LEA，2-AG，diho-moGLAEA，1-AG，2-LG，1-LG，PEA，DEA，OEA，NO-Gly，1-OG，SEA等17种内源性大麻素类物质，其中对PGF2aEA，AEA，LEA，1-AG，2-LG，1-LG，OEA，1-OG，SEA等8种物质进行了定量分析。其中1-OG，2-LG，1-LG含量相对较高;且去卵巢组内源性大麻素明显高于其他组。PCA分析与PLS-DA判别分析中可知，去卵巢组与假手术组明显聚为2类，经七宝美髯方给药治疗后，各组中内源性大麻素的成分有不同变化，且给药剂量越高，越接近阳性给药组与假手术组，这些结果表明七宝美髯方具有雌激素样作用，能改善脂质代谢，降低血浆中内源性大麻素的含量。·4026·
?鞍字食?淀法又叫液液萃取法，其优点是操作简单、快速，缺点是在使用有机溶剂沉淀血浆中蛋白质的同时，部分待测物会包裹其中，与蛋白发生共沉淀，造成待测物的损失。固相萃取法具有回收率高、除杂效果好等优点，不足的是操作相对复杂，而且成本较高。试验比较了利用乙腈、甲醇等作为萃取剂的蛋白质沉淀法和固相萃取法，结果表明固相萃取法对极性较大的内源性大麻素类物质(如DHEA，AEA，LEA)有较高的萃取率，而经乙腈和甲醇处理后的样品中，这3种物质损失较为严重。综合考虑，选择固相萃取进行样品前处理的方法。图3各组中9种内源性大麻素类的含量(x珋±s，n=18)Fig.3Thecontentof9eCBsineachgroup(x珋±s，n=18)·4027·
【参考文献】：
期刊论文
[1]内源性大麻素系统对心血管功能的调节作用[J]. 周广海,金松南,文今福. 中国药理学通报. 2011(07)
本文编号：3406292
【文章来源】：中国中药杂志. 2016,41(21)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)的化学结构
2016年11月第41卷第21期Vol.41，No.21November，2016图222种内源性大麻素、5种氘代替代物及1种内标的提取离子色谱图Fig.2MＲMchromatogramsofthe22eCBs，5deuteratedsurrogatescompoundsand1IS之比来考察回收率，结果显示，除d8-NA-Gly与d4-PEA回收率较低外，其他氘代替代物回收率都在80%以上，结果见表2。3.4方法的应用用上述方法定性定量分析了去卵巢组、假手术组、阳性给药组、七宝美髯方给药组(低、中、高剂量组)大鼠血浆中的内源性大麻素类代谢产物。各组中22种内源性大麻素类的含量结果见图3。在对内源性大麻素类物质定量分析的基础上，采用SIMCA-P12.0软件，对所测样品数据进行主成分分析(PCA)与偏最小二乘判别(PLS-DA)分析，见图4。试验结果表明，共定性检测到PGF2aEA，PGF2a1G，αLEA，DHEA，AEA，LEA，2-AG，diho-moGLAEA，1-AG，2-LG，1-LG，PEA，DEA，OEA，NO-Gly，1-OG，SEA等17种内源性大麻素类物质，其中对PGF2aEA，AEA，LEA，1-AG，2-LG，1-LG，OEA，1-OG，SEA等8种物质进行了定量分析。其中1-OG，2-LG，1-LG含量相对较高;且去卵巢组内源性大麻素明显高于其他组。PCA分析与PLS-DA判别分析中可知，去卵巢组与假手术组明显聚为2类，经七宝美髯方给药治疗后，各组中内源性大麻素的成分有不同变化，且给药剂量越高，越接近阳性给药组与假手术组，这些结果表明七宝美髯方具有雌激素样作用，能改善脂质代谢，降低血浆中内源性大麻素的含量。·4026·
?鞍字食?淀法又叫液液萃取法，其优点是操作简单、快速，缺点是在使用有机溶剂沉淀血浆中蛋白质的同时，部分待测物会包裹其中，与蛋白发生共沉淀，造成待测物的损失。固相萃取法具有回收率高、除杂效果好等优点，不足的是操作相对复杂，而且成本较高。试验比较了利用乙腈、甲醇等作为萃取剂的蛋白质沉淀法和固相萃取法，结果表明固相萃取法对极性较大的内源性大麻素类物质(如DHEA，AEA，LEA)有较高的萃取率，而经乙腈和甲醇处理后的样品中，这3种物质损失较为严重。综合考虑，选择固相萃取进行样品前处理的方法。图3各组中9种内源性大麻素类的含量(x珋±s，n=18)Fig.3Thecontentof9eCBsineachgroup(x珋±s，n=18)·4027·
【参考文献】：
期刊论文
[1]内源性大麻素系统对心血管功能的调节作用[J]. 周广海,金松南,文今福. 中国药理学通报. 2011(07)
本文编号：3406292
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