树干毕赤酵母不对称还原合成光学纯托伐普坦

发布时间：2021-10-11 20:48

　　外消旋体托伐普坦是治疗重度低钠血症和等容量性低钠血症的关键药物,而光学纯托伐普坦在动物体内具备不同的药代性能,目前尚未有微生物全细胞催化托伐普坦前手性酮（PK1）还原生成光学纯托伐普坦的报道.拟建立微生物合成光学纯托伐普坦的催化体系,对催化过程中所使用的菌种、有机溶剂进行选择,并对有机相与水相比例、菌体浓度、底物浓度和转化时间进行优化.结果显示:本试验选取的5种酵母菌均可将PK1催化还原为S型为主的托伐普坦,选定其中具有较高转化率和e.e.值的树干毕赤酵母作为转化菌株.从多种不同log P值的有机相中筛选出大豆油作为两相催化系统的有机相.通过优化发现两相体系中大豆油与水相的体积比为1:9时为最佳油水比例.当菌体浓度为1.0 g/mL,底物浓度为10.0 mg/mL时转化率显著提高.同时,发现全细胞两相催化体系中产物的积累与时间呈线性关系,并在72 h转化率达到最大值.在以上最佳催化条件下全细胞的转化率可达74.5%,产物e.e.为99.0%.本研究建立的大豆油-水的两相催化体系是一种还原催化难溶性前手性酮底物生成光学纯手性醇类化合物的有效方法.（图7表2参24） 

【文章来源】：应用与环境生物学报. 2020,26(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株
        1.1.2 试剂
        1.1.3 培养基
        1.1.4 缓冲液
    1.2 仪器
    1.3 方法
        1.3.1 种子液的制备
        1.3.2用于全细胞转化的菌体的制备
        1.3.3 不同菌种转化PK1效果的考察
        1.3.4 两相转化体系中不同有机溶剂对转化率的影响
        1.3.5 两相转化体系中油水比例对转化率的影响
        1.3.6 菌体浓度、底物浓度、转化时间对转化率的影响
        1.3.7 HPLC分析方法
2 结果与分析
    2.1 不同菌种转化托伐普坦中间体效果的考察
    2.2 两相催化体系中有机溶剂的选择
    2.3 油水比例对转化率的影响
    2.4 两相催化体系中菌体浓度和底物浓度对PK1转化的影响
        2.4.1 菌体浓度对PK1转化的影响
        2.4.2 底物浓度对转化的影响
    2.5 转化时间对全细胞转化率的影响
    2.6 转化产物的光学特性
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]一株高效不对称还原产生（R）-苯基乙二醇的菌株筛选、鉴定及全细胞催化体系[J]. 裴朝红,张红蕾,张超,徐志栋,李玮.  应用与环境生物学报. 2018(02)
[2]解脂酵母羰基还原酶基因的克隆表达及酶学性质[J]. 张红蕾,裴朝红,张超,韩孟楠,徐志栋,李玮.  河北大学学报(自然科学版). 2018(02)
[3]食用植物油中转基因成分检测技术研究进展[J]. 李允静,肖芳,邵林,武玉花,万丹凤,吴刚.  中国油料作物学报. 2017(05)
[4]医药化学品的绿色生物制造[J]. 张志钧,郁惠蕾,许建和.  生物产业技术. 2016(05)
[5]马克斯克鲁维酵母羰基还原酶基因的克隆与表达[J]. 应国清,杨岳微,梅建凤,易喻,金志华.  微生物学通报. 2013(08)

博士论文
[1]羰基还原酶的挖掘和改造[D]. 李爱朋.浙江大学 2016

硕士论文
[1]托伐普坦片的制备工艺和质量研究[D]. 崔莹.天津大学 2016



本文编号：3431217