共递送多柔比星与基因的核壳结构纳米载体用于肿瘤联合治疗的研究

发布时间：2021-10-12 07:22

　　恶性肿瘤是目前影响人类健康的最主要疾病之一,由于肿瘤发生发展的复杂性,单一治疗方法往往无法满足治疗需求,多种策略联合治疗则应运而生。近年来,化学基因联合治疗成为新的研究热点。化学基因联合治疗可联合不同治疗机制,具有增强肿瘤治疗效果,降低化疗药物的给药剂量,降低毒副作用等优势。然而,由于化疗药物与基因药物理化性质的差异,构建适宜的共递送系统成为两者联合应用的重要挑战之一。有效的共递送载体需要具备化疗药物和基因药物的共装载能力,并且根据联合治疗的需求将化疗药物与基因药物分别靶向递送至各自靶细胞内,从而发挥最优的联合治疗效果。核壳结构的纳米载体具有较强的结构层次性和可控释药特性,在化疗与基因药物共递送载体的研究中显示出巨大的发展潜力和应用前景。为满足化学基因联合治疗的不同给药需求,本课题构建两种核壳结构的纳米载体,采用不同的药物装载方式以实现化疗药物与基因的同一靶细胞共递送（肿瘤细胞）和异靶细胞逐级递送（肿瘤细胞和M2型肿瘤相关巨噬细胞）,从而促进了协同治疗效果的发挥。肿瘤细胞共递送载体具备肿瘤微环境酶和pH双重敏感的特征,有利于提高肿瘤细胞共递送靶向性,降低药物的毒副作用。基因与化疗药物异... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：187 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
符号说明
前言
    一、肿瘤的化学基因联合治疗
        1. 肿瘤的化学治疗
        2. 肿瘤的基因治疗
        3. 肿瘤的化学基因联合治疗
    二、化疗药物与基因共递送纳米载体
        1. 聚合物复合物
        2. 脂质体
        3. 胶束
        4. 树枝状体
        5. 无机纳米粒
    三、核壳结构的共递送纳米载体
    四、课题设计
第一部分 双敏感靶向核壳结构纳米载体共递送多柔比星与质粒DNA至肿瘤细胞的研究
    第一章 新型载药材料的合成及性质评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 细胞培养
            4. 溶液的配制
                4.1 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)
                4.2 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 6.5)
                4.3 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 5.0)
                4.4 连接缓冲液(pH 6.0)
        二、实验方法
            1. 材料合成
                1.1 HP的合成
                1.2 DHP的合成
            2. DOX含量测定方法建立
            3. DHP中DOX载药量测定
            4. pH敏感的DOX释放实验
            5. 体外细胞毒性
        三、实验结果
            1. 材料合成
                1.1 HP的合成
                1.2 DHP的合成
            2. DOX含量测定方法建立
            3. DHP中DOX载药量测定
            4. pH敏感的DOX释放实验
            5. 体外细胞毒性
        四、讨论
        五、本章小结
    第二章 双敏感靶向共递送核壳结构纳米载体的构建及初步评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 细胞培养
            4. 质粒的抽提
            5. 细菌的培养
            6. 溶液配制
        二、实验方法
            1. DDN的制备
            2. DDN中DHP与DNA质量比的考察
            3. DDN体外转染实验
            4. DDN最优处方的理化性质考察
            5. HDDN 的制备
            6. HDDN中HA与DNA质量比的考察
            7. HDDN最优处方的理化性质考察
            8. 肝素提取实验
            9. 抗核酸酶稳定性考察
            10. 血浆稳定性考察
            11. 透明质酸酶敏感性考察
        三. 实验结果
            1. DDN的制备
            2. DDN体外转染实验
            3. DDN最优处方的理化性质考察
            4. HDDN的制备
            5. HDDN最优处方的理化性质考察
            6. 肝素提取实验
            7. 抗核酸酶稳定性考察
            8. 血浆稳定性考察
            9. 透明质酸酶敏感性考察
        四、讨论
        五、本章小结
    第三章 双敏感靶向共递送核壳结构纳米载体的体外评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 细胞
            4. 溶液配制
        二、实验方法
            1. 细胞表面CD44受体表达
            2. 细胞毒性实验
            3. 体外转染实验
            4. 细胞摄取实验
            5. 内吞抑制实验
            6. CD44受体介导入胞机制实验
            7. 体外共递送实验
        三、实验结果
            1. 细胞表面CD44受体表达
            2. 细胞毒性实验
            3. 体外转染实验
            4. 细胞摄取实验
            5. 内吞抑制实验
            6. CD44受体介导入胞机制实验
            7. 体外共递送实验
        四、讨论
        五、本章小结
    第一部分 小结
第二部分 异靶点逐级靶向核壳结构纳米载体共递送多柔比星与siRNA用于化学免疫联合治疗的研究
    第四章 新型靶向载药材料的合成与评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 溶液的配制
                3.1 0.5 M NaOH溶液
                3.2 0.5 M HCl溶液
                3.3 1.0 M NaOH溶液
                3.4 0.1 M HCl溶液
        二、实验方法
            1. CPN的合成
            2. CAD的合成
            3. CDPN的合成
            4. MPEI的合成
            5. DOX含量测定方法的建立
            6. CDPN中DOX载药量测定
            7. CDPN等电点的测定
        三、实验结果
            1. CPN的合成
            2. CAD的合成
            3. CDPN的合成
            4. MPEI的合成
            5. DOX含量测定方法的建立
            6. CDPN中DOX载药量测定
            7. CDPN等电点的测定
        四、讨论
        五、本章小结
    第五章 异靶点逐级靶向核壳结构纳米载体的构建及评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 溶液配制
                3.1 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)
                3.2 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 6.5)
                3.3 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 5.0)
        二、实验方法
            1. MPR的制备
            2. MPEI与siRNA质量比的考察
                2.1 琼脂糖凝胶的制备
                2.2 凝胶电泳阻滞实验
                2.3 不同质量比MPR的理化性质考察
            3. MPR最优处方的理化性质
            4. CDMPR的制备
            5. CDPN与siRNA质量比的考察
                5.1 凝胶电泳阻滞实验
                5.2 不同质量比CDMPR的理化性质考察
            6. CDMPR最优处方的理化性质考察
            7. 电荷翻转实验
            8. 肝素提取实验
            9. 抗核酸酶稳定性考察
            10. 血浆稳定性考察
            11. 不同pH值PBS中DOX含量测定方法的建立
            12. 不同pH值PBS中siRNA含量测定方法的建立
            13. 体外释放实验
        三. 实验结果
            1. MPR的制备
            2. CDMPR的制备
            3. MPR与CDMPR最优处方的理化性质表征
            4. 电荷翻转实验
            5. 抗核酸酶稳定性考察
            6. 血浆稳定性考察
            7. DOX含量测定方法的建立
            8. siRNA含量测定方法的建立
            9. 体外释放实验
        四、讨论
        五、本章小结
    第六章 异靶点逐级靶向核壳结构纳米载体的体外评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 细胞
            4. 溶液配制
                4.1 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)
                4.2 0.1 M磷酸盐缓冲液(PBS,pH 6.5)
                4.3 细胞实验用磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.4,0.01 M)
                4.4 10× SDS-PAGE电泳缓冲液
                4.5 5%浓缩胶
                4.5 8%分离胶
                4.6 10×转膜缓冲液
                4.7 10×TBS缓冲液
                4.8 TBST缓冲液
                4.9 封闭液
        二、实验方法
            1. 体外摄取实验
                1.1 MPR摄取实验
                1.2 CDMPR的pH敏感摄取实验
            2. 异靶点靶向摄取实验
            3. 体外药效实验
            4. IKK β表达检测
            5. 巨噬细胞极化实验
        三、实验结果
            1. 体外摄取实验
            2. 异靶点靶向实验
            3. 体外细胞毒性实验
            4. IKKβ表达检测
            5. 巨噬细胞极化实验
        四、讨论
        五、本章小结
    第七章 异靶点逐级靶向核壳结构纳米载体的体内评价
        一、实验材料
            1. 试剂与药品
            2. 仪器设备
            3. 细胞与动物
        二、实验方法
            1. 肿瘤组织药物分布实验
            2. 小鼠活体成像实验
            3. 体内药效实验
            4. 肿瘤组织HE染色、Ki67染色及TUNEL染色
            5. 体内巨噬细胞极化实验
            6. 细胞因子检测
            7. 初步安全性评价
        三、实验结果
            1. 肿瘤组织药物分布实验
            2. 小鼠活体成像实验
            3. 体内药效实验
            4. 肿瘤组织HE染色、Ki67染色及TUNEL染色
            5. 体内巨噬细胞极化实验
            6. 细胞因子检测
            7. 初步安全性评价
        四、讨论
        五、本章小结
    第二部分 小结
全文总结与展望
    一、全文总结
    二、创新点
    三、展望
参考文献
致谢
攻读博士期间发表论文目录
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[2]透明质酸在肿瘤治疗中的应用[J]. 王天琪,张娜.  生命的化学. 2014(05)



本文编号：3432129