膝沟藻毒素1/4核酸适配体的筛选，结合机制及其应用研究

发布时间：2021-10-17 14:44

　　膝沟藻毒素1/4（GTX 1/4）是麻痹性贝类毒素中最具有代表性的神经毒素之一。该毒素主要由海洋藻类产生,通过水生食物链在鱼类或贝类体内蓄积。人类误食染毒的海产品后常引起麻痹性贝类中毒,主要表现为肌肉麻痹、头痛恶心、运动障碍、呼吸困难等中毒症状,甚至窒息死亡。其毒性主要是由于GTX 1/4能够选择性抑制神经细胞表面的Na+通道,导致神经系统传输障碍,进而造成神经性中毒。目前,常用的海洋生物毒素检测方法主要包括小鼠生物学法、液相色谱法和免疫分析法等,而这些检测方法由于耗时长、灵敏度低、稳定性差等问题,已无法满足该毒素快速检测的需求。因此亟需发展一种灵敏,特异的检测新方法用于海洋神经毒素GTX 1/4的快速定量分析。核酸适配体作为一种新型的分子识别元件,通过与生物传感器平台相结合,已经发展出多种新颖的检测方法,并在分析诊断,食品安全等领域得到广泛应用。本研究中利用两种不同的SELEX技术（GO-SELEX,MB-SELEX）筛选获得与海洋神经毒素GTX 1/4特异性结合的高亲和力适配体。在筛选过程中,我们发现GO-SELEX作为一种先进的适配体筛选技术,与传统的MB-SELEX相比,具有显... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

生物膜干涉技术测定的流程图

膝沟藻毒素 1/4 核酸适配体的筛选，结合机制及其应用研究、结果与讨论一）、GTX 1/4 适配体的筛选如图 4 所示，海洋神经毒素 GTX 1/4 核酸适配体的筛选通过 GO-SELEX 和B-SELEX 两种不同的方法同时进行。

LEX 与 MB-SELEX 方法学的比较与传统的 MB-SELEX 相比， GO-SELEX 具有更高的筛选效 在筛选过程中，其 ssDNA 回收率显著高于 MB-SELEX（图 筛选获得的文库具有高度的同源性，且有多条重复序列，而同源性较低，几乎无重复序列（图 6、图 7）；最重要的是，通过文库中有 6 条适配体序列（GO12, GO9, GO37, GO17, GO18/4 高亲和力的结合，且亲和力的范围在几十至几百纳摩尔之4, GO6）显示不结合。然而，通过 MB-SELEX 筛选获得的序乎不结合，仅有三条序列（MB3, MB11, MB10）显示弱相互水平，两者相差数百倍。同时，GO-SELEX 技术操作简单，，且筛选的靶分子无须固化，从而避免了靶分子由于固化导致SELEX 作为一种先进的适配体筛选技术，具有简单、高效、小分子核酸适配体的发展提供了一种新方法。


本文编号：3441938