多发性骨髓瘤关键膜抗原HLA-E的鉴定及其靶向亲合肽的设计

发布时间：2021-12-19 12:44

　　目的:多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma,MM）是一组以骨髓中克隆性浆细胞异常扩增为特点的血液系统常见的恶性疾病,其发病率在血液系统肿瘤当中占据第二位。MM存在一系列严重的并发症,严重影响患者的生存质量。迄今为止,MM仍不可治愈,故寻找新的治疗方式、提高患者治疗后的生存质量十分重要。目前,MM迎来了免疫治疗时代,而靶向治疗正是免疫治疗的重要组成部分。理想的靶点是在恶性浆细胞上高表达的膜抗原,而在正常细胞及组织不表达（或者低表达）。发现理想的靶点,设计靶向药物,同时募集并活化免疫细胞发挥抗肿瘤效应,可能是MM治疗的新方向。由此可见,寻找新的靶点对于MM的治疗至关重要。本课题主要研究内容包括:（1）探索多发性骨髓瘤治疗的新靶点（2）探讨新靶点是否具有临床判断预后的价值（3）设计靶向亲和该靶点的肽类候选物研究方法:1、生物信息学分析利用大样本公共数据库GEO（GEO,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo）中的包含正常浆细胞对照的MM数据集作为分析对象。筛选MM患者高表达而正常浆细胞低表达的差异基因;筛选在MM发病中起关键作用的基因。2、临床验证靶点mRN...

【文章来源】： 中国医科大学辽宁省

【文章页数】：93 页

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:基于公共大样本数据挖掘分析筛选多发性骨髓瘤关键基因HLA-E
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 利用公共数据库寻找多发性骨髓瘤高表达的差异基因
            2.2.2 验证关键基因mRNA在临床患者中的表达情况
            2.2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 筛选多发性骨髓瘤高表达差异基因
        3.2 构建蛋白相互作用网
        3.3 确认关键集簇
        3.4 筛选核心基因
        3.5 确认HLA-E作为多发性骨髓瘤的关键靶点
        3.6 关键集簇及核心基因在多发性骨髓瘤发病中的作用
        3.7 验证HLA-E在临床患者中mRNA的表达情况
    4 讨论
第二部分:HLA-E在多发性骨髓瘤细胞中的表达及临床意义
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 标本来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 患者的纳入标准
            2.2.2 多发性骨髓瘤分期标准
            2.2.3 临床资料收集
            2.2.4 流式细胞术
            2.2.5 免疫组织化学染色
            2.2.6 免疫组化结果评分
            2.2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 流式细胞术检测HLA-E在骨髓瘤患者中的表达及临床参数分析
            3.1.1 患者的一般情况
            3.1.2 流式细胞术证实HLA-E在骨髓瘤患者中高表达
            3.1.3 HLA-E在晚期及高危骨髓瘤中高表达
        3.2 免疫组化检测HLA-E在骨髓瘤中的表达情况及临床参数分析
            3.2.1 患者一般情况
            3.2.2 HLA-E在骨髓瘤及非恶性浆细胞病中的差异表达
            3.2.3 HLA-E在多发性骨髓瘤晚期患者中高表达
            3.2.4 HLA-E高表达是多发性骨髓瘤预后不良因素
            3.2.5 建立含有HLA-E表达情况的分期体系
    4 讨论
第三部分:靶向HLA-E亲和肽的设计及功能验证
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 MOE设计靶向亲和肽
            2.2.2 细胞培养及转染
            2.2.3 合成多肽
            2.2.4 流式细胞术
            2.2.5 构建高表达HLA-E的骨髓瘤细胞系
            2.2.6 细胞免疫荧光染色
            2.2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 利用MOE设计靶向HLA-E的亲和肽
        3.2 构建靶向亲和HLA-E的肽库
        3.3 验证多肽与高表达HLA-E细胞系的亲合性
            3.3.1 合成带有荧光标记的亲和肽
            3.3.2 流式细胞术证实肽与HLA-E的亲和性
            3.3.3 免疫荧光证实P3与骨髓瘤细胞系HLA-E的亲和性
        3.4 验证多肽与高表达HLA-E患者骨髓瘤细胞的亲合性
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3544441