人GDF-15的克

发布时间：2021-12-22 09:28

　　目的:对人生长分化因子-15（human growth differentiation factor-15,hGDF-15）成熟肽基因进行克隆,诱导hGDF-15蛋白表达并对部分表达条件进行优化,对建模成功的动物模型注射hGDF-15蛋白观察其作用,为hGDF-15药理活性和生物学功能的研究奠定基础。方法:利用PCR技术克隆人GDF-15成熟肽基因,将其连接到pET-28a载体上构建pET-28a-hGDF-15原核表达载体;在此基础上将其转入Rosetta（DE3）大肠杆菌感受态,获得重组大肠杆菌,分别采用不同温度（16,25,37℃）、不同IPTG浓度（0.1,0.25,0.5,0.75,1mmol/L）和不同时间（12,24,36,48 h）对其进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳,利用Gel Quant Express软件对菌体破碎离心的上清组分和沉淀组分进行含量测定,设计正交试验,分析上清组分和沉淀组分最适诱导表达条件;选用DAB显色法对诱导出的蛋白样品进行Western blot鉴定,利用Ni-Agarose亲和柱对表达产物进行纯化,设置不同浓度的GuNTA（2... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

hGDF-15基因和蛋白质的结构

pET-28a(+)载体示意图

hGDF-15成熟肽基因PCR产物电泳图谱

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]抗GDF15单克隆抗体制备及功能鉴定[D]. 詹峰.南京医科大学 2011



本文编号：3546168