不同亚型血清淀粉样蛋白A1的原核表达及其抗白色念珠菌活性研究
发布时间：2022-01-17 17:17
血清淀粉样蛋白A（Serum amyloid A,SAA）是一类血清蛋白家族的统称,在各种动物组织中高度保守。成熟的SAA蛋白质大小为1214 kD,一级结构由103104个氨基酸序列组成,不同的SAA二级结构有不同的寡聚状态。SAA与疾病高度相关,参与很多疾病的致病性,在免疫中也有重要作用。研究表明,SAA对许多革兰氏阴性菌具有抑制作用,但对真菌的抑制作用尚不得知。因此,探究SAA对真菌的抑制功能,将为SAA的抑菌机制的研究或者新的抑菌机制的提出奠定良好的基础,同时也为新药研发提供理论指导。本研究以重组人SAA1蛋白为研究对象,原核表达带有His标签的SAA1蛋白,过镍柱获得纯化蛋白。同时探索了SAA1蛋白对白色念珠菌SC5314的抑菌效果。主要研究过程及结果如下。1.重组质粒的构建:克隆人SAA1三亚型基因,将其与载体pET-28a连接,获得重组载体。2.目的蛋白的诱导、纯化与鉴定。将重组载体转化到KS1000、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、Rosetta gami2（DE3）四种宿主表达菌中,IPTG诱导表达,SDS-P...
【文章来源】：南阳师范学院河南省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人SAA1氨基酸序列
不同亚型血清淀粉样蛋白 A1 的原核表达及其抗白色念珠菌活性研究他螺旋束不同，SAA1.1 螺旋束是锥形的，螺旋 1 和螺旋 3 的 N 末端以及螺旋 2 和螺旋 4 的 C 末端紧密堆积在一起（图 1-2A）。C 末端尾部是 89~104 残基，有序排列并包裹在束的一个面上，与四个α-螺旋中的三个形成多个盐桥和氢键，包括螺旋 1 的 2位上 Glu 和 29 位上 Tyr，螺旋 2 的 35 位上 Tyr 和 39 位上 Arg，和螺旋 4 的 85 位上Trp 和 86 位上 Gly（图 1-2C）。值得注意的是，104 位上 Tyr 的 C 末端羧基与 35 位上的 Tyr，39 位上的 Arg 和 96 位上的 Arg 形成四残基电荷簇（图 1-2C））。在该电荷四联体中，C 末端羧基和 35 位上 Tyr 的 OH 与 39 位 Arg 和 96 位 Arg 形成分叉盐桥，有效地锁定羧酸酯末端。C 端尾部和 SAA1.1 螺旋之间广泛且保守地相互作用表明，C 尾部功能稳定了 SAA1.1 螺旋束结构。
2.3.2 感受态细胞的效果检验为了检验制备的感受态效果，将pET-28a-saa1γ重组质粒转化到四种制备的感受态菌株中，涂板、培养，结果如图2-1所示。可以看出，大肠杆菌KS1000（DE3）、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）三种感受态菌落很多；但大肠杆菌Rosetta gami2（DE3）转化后的菌落最少，重新做后菌落也比较多（此处未给出重做结果）。以上结果表明制备的四种感受态质量高，易于接受外源DNA。
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清淀粉样蛋白A的研究进展[J]. 曹琳,宋晓文,任金来,宿振国. 安徽医药. 2019(02)
[2]血清淀粉样蛋白A（SAA）在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的浓度水平研究[J]. 杨朝美,杨晏. 中国实验诊断学. 2018(11)
[3]白色念珠菌麦角甾醇的储存、调节和功能[J]. 韩叙,廖国建. 国外医药(抗生素分册). 2018(05)
[4]慢性阻塞性肺疾病急性加重期伴肺炎患者血清IL-6、HPT、SAA的检测价值分析[J]. 高淑平,温旺荣,谭艳玲. 国际检验医学杂志. 2018(12)
[5]SAA、NLR预测急性胰腺炎严重程度的价值[J]. 谷小玉,黄尚书,梁伟新,刘小真,冯伟兆,赖勇强,朱明章,李志宏. 中国医药导报. 2018(16)
[6]血清淀粉样蛋白A C反应蛋白 白细胞联合检测在病毒性感染疾病中的应用[J]. 宋延荣. 实用医技杂志. 2018(01)
[7]联合检测SAA和CRP对小儿感染性疾病的早期鉴别诊断[J]. 彭致平,黄明兰,隋洪. 实验与检验医学. 2017(03)
[8]血清淀粉样蛋白A联合C反应蛋白检测在手足口病患儿中的诊断价值[J]. 赵昕峰,吴亦栋,高扬,陈东,陈刚,周俊,陈礼芳. 中华传染病杂志. 2016 (07)
[9]PCT、hs-CRP及SAA检测在感染性疾病诊断中的临床应用价值[J]. 余珈漫,陆怡德. 实用检验医师杂志. 2014(04)
[10]原核表达HIV-1抗原蛋白的ELISA活性检测[J]. 宋凯,张春玉,郝丽霞,黄国辉,刘立侠. 信阳师范学院学报(自然科学版). 2013(02)
博士论文
[1]脐带间充质干细胞治疗颅脑创伤的基础与临床研究[D]. 商崇智.天津医科大学 2018
[2]抗CD40×HER2双特异性单链抗体的构建及抑制肿瘤增殖的实验研究[D]. 陆礼.天津医科大学 2017
[3]急性肺栓塞大鼠细胞因子的变化及尿激酶的干预作用[D]. 费建文.山东大学 2014
[4]口腔上皮细胞与白色念珠菌相互作用的体外实验研究[D]. 张凌.中国医科大学 2005
硕士论文
[1]结核分枝杆菌检测方法的初探及其与宿主互作蛋白的筛选[D]. 伍享.华中农业大学 2018
[2]基因重组人血清淀粉样蛋白A1的制备及检测方法学的建立[D]. 赵玉环.长春理工大学 2016
[3]鲤鱼肌肉脯氨酸内肽酶的分离纯化及性质分析[D]. 王梦想.集美大学 2012
[4]钝齿棒杆菌N-乙酰谷氨酸激酶编码基因argB的克隆表达研究[D]. 刘飞.江南大学 2008
[5]新城疫病毒血凝素—神经氨酸酶基因的克隆及其主要抗原域的原核表达[D]. 李杰.河南农业大学 2007
[6]L-天冬氨酸α-脱羧酶生产β-丙氨酸的研究[D]. 高丽娟.浙江工业大学 2007
[7]重组人Smac及Smac-PTD的制备与初步功能分析[D]. 胡颖.第三军医大学 2006
本文编号：3595124
【文章来源】：南阳师范学院河南省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人SAA1氨基酸序列
不同亚型血清淀粉样蛋白 A1 的原核表达及其抗白色念珠菌活性研究他螺旋束不同，SAA1.1 螺旋束是锥形的，螺旋 1 和螺旋 3 的 N 末端以及螺旋 2 和螺旋 4 的 C 末端紧密堆积在一起（图 1-2A）。C 末端尾部是 89~104 残基，有序排列并包裹在束的一个面上，与四个α-螺旋中的三个形成多个盐桥和氢键，包括螺旋 1 的 2位上 Glu 和 29 位上 Tyr，螺旋 2 的 35 位上 Tyr 和 39 位上 Arg，和螺旋 4 的 85 位上Trp 和 86 位上 Gly（图 1-2C）。值得注意的是，104 位上 Tyr 的 C 末端羧基与 35 位上的 Tyr，39 位上的 Arg 和 96 位上的 Arg 形成四残基电荷簇（图 1-2C））。在该电荷四联体中，C 末端羧基和 35 位上 Tyr 的 OH 与 39 位 Arg 和 96 位 Arg 形成分叉盐桥，有效地锁定羧酸酯末端。C 端尾部和 SAA1.1 螺旋之间广泛且保守地相互作用表明，C 尾部功能稳定了 SAA1.1 螺旋束结构。
2.3.2 感受态细胞的效果检验为了检验制备的感受态效果，将pET-28a-saa1γ重组质粒转化到四种制备的感受态菌株中，涂板、培养，结果如图2-1所示。可以看出，大肠杆菌KS1000（DE3）、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）三种感受态菌落很多；但大肠杆菌Rosetta gami2（DE3）转化后的菌落最少，重新做后菌落也比较多（此处未给出重做结果）。以上结果表明制备的四种感受态质量高，易于接受外源DNA。
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清淀粉样蛋白A的研究进展[J]. 曹琳,宋晓文,任金来,宿振国. 安徽医药. 2019(02)
[2]血清淀粉样蛋白A（SAA）在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的浓度水平研究[J]. 杨朝美,杨晏. 中国实验诊断学. 2018(11)
[3]白色念珠菌麦角甾醇的储存、调节和功能[J]. 韩叙,廖国建. 国外医药(抗生素分册). 2018(05)
[4]慢性阻塞性肺疾病急性加重期伴肺炎患者血清IL-6、HPT、SAA的检测价值分析[J]. 高淑平,温旺荣,谭艳玲. 国际检验医学杂志. 2018(12)
[5]SAA、NLR预测急性胰腺炎严重程度的价值[J]. 谷小玉,黄尚书,梁伟新,刘小真,冯伟兆,赖勇强,朱明章,李志宏. 中国医药导报. 2018(16)
[6]血清淀粉样蛋白A C反应蛋白 白细胞联合检测在病毒性感染疾病中的应用[J]. 宋延荣. 实用医技杂志. 2018(01)
[7]联合检测SAA和CRP对小儿感染性疾病的早期鉴别诊断[J]. 彭致平,黄明兰,隋洪. 实验与检验医学. 2017(03)
[8]血清淀粉样蛋白A联合C反应蛋白检测在手足口病患儿中的诊断价值[J]. 赵昕峰,吴亦栋,高扬,陈东,陈刚,周俊,陈礼芳. 中华传染病杂志. 2016 (07)
[9]PCT、hs-CRP及SAA检测在感染性疾病诊断中的临床应用价值[J]. 余珈漫,陆怡德. 实用检验医师杂志. 2014(04)
[10]原核表达HIV-1抗原蛋白的ELISA活性检测[J]. 宋凯,张春玉,郝丽霞,黄国辉,刘立侠. 信阳师范学院学报(自然科学版). 2013(02)
博士论文
[1]脐带间充质干细胞治疗颅脑创伤的基础与临床研究[D]. 商崇智.天津医科大学 2018
[2]抗CD40×HER2双特异性单链抗体的构建及抑制肿瘤增殖的实验研究[D]. 陆礼.天津医科大学 2017
[3]急性肺栓塞大鼠细胞因子的变化及尿激酶的干预作用[D]. 费建文.山东大学 2014
[4]口腔上皮细胞与白色念珠菌相互作用的体外实验研究[D]. 张凌.中国医科大学 2005
硕士论文
[1]结核分枝杆菌检测方法的初探及其与宿主互作蛋白的筛选[D]. 伍享.华中农业大学 2018
[2]基因重组人血清淀粉样蛋白A1的制备及检测方法学的建立[D]. 赵玉环.长春理工大学 2016
[3]鲤鱼肌肉脯氨酸内肽酶的分离纯化及性质分析[D]. 王梦想.集美大学 2012
[4]钝齿棒杆菌N-乙酰谷氨酸激酶编码基因argB的克隆表达研究[D]. 刘飞.江南大学 2008
[5]新城疫病毒血凝素—神经氨酸酶基因的克隆及其主要抗原域的原核表达[D]. 李杰.河南农业大学 2007
[6]L-天冬氨酸α-脱羧酶生产β-丙氨酸的研究[D]. 高丽娟.浙江工业大学 2007
[7]重组人Smac及Smac-PTD的制备与初步功能分析[D]. 胡颖.第三军医大学 2006
本文编号：3595124
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