镉胁迫引起胎盘滋养层细胞氧化损伤的机制研究

发布时间：2022-05-08 17:50

　　镉（Cadmium,Cd）是一种被广泛应用于工业生产中的有毒重金属,对发展中国家以及高度工业化的国家公共卫生造成了严重危害。之前的研究表明,Cd可以通过食物链、职业暴露和香烟烟雾而富集,最终蓄积在血液,脑,肾脏和肝脏以及生殖器官中,包括卵巢,睾丸和胎盘。尤其是怀孕期间妇女更容易受到Cd毒性的影响,因为Cd更容易积聚在胎盘中,导致一系列与胎盘相关的疾病,如先兆子痫、胎儿生长受限和流产等。因此,本研究以人的胎盘滋养层（HTR-8/SVneo）细胞为研究模型,探究Cd诱导人胎盘滋养层细胞损伤及凋亡的分子机制,为研究Cd引起哺乳动物流产的致病机理提供理论基础。实验结果如下:1.MTT实验结果表明,CdCl₂可以降低HTR-8/SVneo细胞活力,抑制细胞生长,并且具有时间和剂量依赖性关系。通过光学显微镜观察发现HTR-8/SVneo细胞经CdCl₂处理后,随着CdCl₂浓度的增大和处理时间的延长,细胞形态有明显的变圆皱缩现象。DCFH-DA荧光染色和流式细胞术检测均表明,CdCl₂处理可以诱导HTR-8/S... 

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1 Cd的污染现状及对人体的危害
        1.1 Cd的污染现状
        1.2 Cd对人体的危害
        1.3 Cd的生殖毒性
        1.4 Cd对胎盘的影响
        1.5 Cd对滋养层细胞的影响
    2 Cd的毒性机制研究
        2.1 Cd与活性氧
        2.2 Cd与抗氧化系统
        2.3 Cd与脂质过氧化
        2.4 Cd与线粒体损伤
        2.5 Cd与 DNA损伤
        2.6 Cd与细胞周期
        2.7 Cd与细胞凋亡
    3 NAC的研究进展
    4 本学位论文的研究内容及研究意义
第二章 镉对HTR-8/SVneo细胞活性及抗氧化系统的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞系
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 细胞冻存与复苏
            1.2.3 MTT实验检测细胞活性
            1.2.4 光学显微镜观察细胞形态变化
            1.2.5 流式细胞术检测细胞内ROS含量
            1.2.6 SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA含量检测
            1.2.7 数据分析
    2 结果
        2.1 CdCl_2对HTR-8/SVneo细胞活性的影响
        2.2 CdCl_2对HTR-8/SVneo细胞形态的影响
        2.3 CdCl_2对HTR-8/SVneo细胞内ROS水平的影响
        2.4 CdCl_2对HTR-8/SVneo细胞内抗氧化酶活性的影响
        2.5 CdCl_2对HTR-8/SVneo细胞内脂质过氧化水平的影响
    3 讨论
第三章 镉通过氧化应激诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞系
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)
            1.2.3 碱性彗星实验检测DNA损伤
            1.2.4 免疫荧光检测γ-H2AX
            1.2.5 流式细胞术检测细胞周期分布
            1.2.6 Hoechst33342染色
            1.2.7 AO/EB染色
            1.2.8 Annexin-V FITC/PI双染检测细胞凋亡率
            1.2.9 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化
            1.2.10 Western blot检测蛋白表达水平
            1.2.11 透射电子显微镜观察细胞超微结构变化
            1.2.12 数据分析
    2 结果
        2.1 CdCl_2引起HTR-8/SVneo细胞线粒体损伤
        2.2 CdCl_2引起HTR-8/SVneo细胞DNA损伤
        2.3 CdCl_2引起HTR-8/SVneo细胞周期阻滞于G0/G1期
        2.4 CdCl_2诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡形态学检测
        2.5 CdCl_2诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡
    3 讨论
第四章 镉特异性诱导小鼠胎盘中滋养层细胞发生氧化损伤
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 动物染毒及取材
            1.2.2 石蜡切片及HE染色
            1.2.3 免疫荧光
            1.2.4 数据分析
    2 结果
        2.1 CdCl_2降低小鼠胎盘质量和直径
        2.2 CdCl_2引起小鼠胎盘组织病理学损伤
        2.3 CdCl_2引起小鼠胎盘中滋养层细胞DNA损伤
        2.4 CdCl_2引起小鼠胎盘中滋养层细胞凋亡
    3 讨论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式


【参考文献】：
期刊论文
[1]氯化镉对体外培养的人胎盘滋养细胞增殖与凋亡的影响[J]. 胡隽,朱华龙,熊永伟,南园,冯玉杰,张翔,徐德祥,王华.  毒理学杂志. 2018(04)
[2]Cadmium Activates Reactive Oxygen Species-dependent AKT/mT OR and Mitochondrial Apoptotic Pathways in Neuronal Cells[J]. YUAN Yan,WANG Yi,HU Fei Fei,JIANG Chen Yang,ZHANG Ya Jing,YANG Jin Long,ZHAO Shi Wen,GU Jian Hong,LIU Xue Zhong,BIAN Jian Chun,LIU Zong Ping.  Biomedical and Environmental Sciences. 2016(02)
[3]低剂量镉暴露胎盘屏障作用及相关蛋白探讨[J]. 刘莉莉,邓莹玉,周珊宇,董明,崔凡,曾玉梨,陈晓燕,赵娜,李宏玲.  毒理学杂志. 2015(04)
[4]镉暴露对黑斑蛙精巢ROS的诱导及其蛋白质氧化损伤作用机理[J]. 曹慧,施蔡雷,贾秀英.  生态学报. 2012(13)
[5]镉致鸡肾脏的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护效应[J]. 秦卫红,王倩倩.  中国家禽. 2011(23)
[6]某镉电池厂镉作业女性32人尿镉及血清中性激素的水平[J]. 虞敏,李倩兰,王薇.  职业与健康. 2011(17)
[7]镉影响大鼠胎盘发育及Bcl-2和Bax的表达[J]. 王财圆,王东,蔡恒,崔春红,冯国营,程海生,杜卫军,曲昌俊,和青霞.  中国优生与遗传杂志. 2008(11)
[8]Role of oxidative stress in the apoptosis of hepatocellular carcinoma induced by combination of arsenic trioxide and ascorbic acid[J]. Jing-jing LI~2 Qiang TANG~2 Yuan LI Ben-rong HU Zhang-yin MING Qin FU~3 Jia-qing QIAN Ji-zhou XIANG~3 Department of Pharmacology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2006(08)

博士论文
[1]镉致大鼠肝细胞毒性机理研究[D]. 汪纪仓.扬州大学 2010

硕士论文
[1]镉对华溪蟹的损伤与低分子量壳聚糖的防护作用[D]. 周妍英.山西大学 2011
[2]镉对华溪蟹的免疫毒性效应[D]. 秦圣娟.山西大学 2011
[3]镉对南方鲇抗氧化酶系统和脂质过氧化作用的影响[D]. 皇甫加清.西南大学 2011



本文编号：3652103