双酪氨酸诱导小鼠心肌损伤和能量代谢障碍的研究

发布时间：2022-07-16 18:39

　　在食品加工和储藏过程中,酪氨酸极易被氧化产生酪氨酸氧化产物（OTPs）。前期有研究发现摄入OTPs会引起机体组织器官（如肝脏、肾脏、心肌、胰腺、脑和肠道）的氧化应激,造成组织损伤。而双酪氨酸（Dityr）作为OTPs的主要成分,具有与甲状腺激素类似的稳定结构。故本研究将60只健康雌性昆明小鼠,随机分成3组,空白对照组（Con）;OTPs组和Dityr组,每天分别灌胃生理盐水、960μg/kg?bw的OTPs、320μg/kg?bw的Dityr,连续灌胃6周和10周,对生理生化指标进行检测,来探究Dityr对小鼠心肌功能损伤及能量代谢的影响。首先对灌胃6周的小鼠血浆和尿液进行代谢组学分析,结果表明,OTPs和Dityr灌胃可诱导小鼠血浆和尿液中氧化应激和能量代谢相关的小分子代谢物变化,血浆和尿液中显著增加的氧化三甲胺（TMAO）的含量,提示OTPs和Dityr灌胃可能会引起小鼠心肌损伤;OTPs和Dityr灌胃还会引起小鼠肠道微生物群功能改变、胆碱生物利用度降低、氨基酸代谢改变等多种代谢途径的变化。随后检测灌胃10周的小鼠血浆和心肌组织的生化指标,结果表明,OTPs和Dityr灌胃均导致... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略语对照表
1 绪论
    1.1 双酪氨酸概述
        1.1.1 食品中蛋白质氧化产物的产生
        1.1.2 酪氨酸氧化产物的产生
        1.1.3 双酪氨酸的产生
        1.1.4 双酪氨酸与氧化应激
        1.1.5 双酪氨酸与疾病的关系
    1.2 氧化应激与心肌
        1.2.1 氧化应激与心血管疾病
        1.2.2 氧化应激与心肌炎症
        1.2.3 氧化应激与心肌能量代谢
    1.3 甲状腺激素与心肌
    1.4 代谢组学的简介及在营养学中的应用
    1.5 立题意义与主要研究内容
        1.5.1 立题意义
        1.5.2 本文主要研究内容
2 材料与方法
    2.1 实验试剂与仪器
        2.1.1 主要原料与主要试剂
        2.1.2 主要实验仪器
    2.2 动物灌胃实验
        2.2.1 实验动物分组及灌胃
        2.2.2 实验样品采集
    2.3 代谢组学检测
        2.3.1 血浆和尿液代谢组学样品的处理
        2.3.2 血浆和尿液样品~1H-NMR检测
        2.3.3 血浆和尿液样品~1H-NMR图谱解析
        2.3.4 血浆和尿液代谢组学样品的~1H-NMR数据分析
    2.4 生化指标检测
        2.4.1 血液及心肌组织ROS水平的测定
        2.4.2 血浆和心肌组织的氧化还原指标的测定
        2.4.3 血浆和心肌组织的蛋白氧化产物和脂质过氧化物含量的测定
        2.4.4 心肌组织石蜡包埋和切片染色
        2.4.5 血浆中炎性因子含量的测定
        2.4.6 心肌损伤相关指标的测定
        2.4.7 血浆和心肌组织FFA和ATP酶活力的测定
        2.4.8 心肌ATP含量的测定
        2.4.9 血浆甲状腺激素水平的测定
        2.4.10 RNA的提取及反转录
        2.4.11 实时荧光定量PCR
    2.5 双荧光素酶报告基因系统检测
        2.5.1 双荧光素酶报告基因系统活性检测原理
        2.5.2 PsiCHECK2-TRE载体构建
        2.5.3 细胞培养
        2.5.4 双荧光素酶报告基因系统活性检测
    2.6 数据处理
3 结果与讨论
    3.1 双酪氨酸对小鼠血浆和尿液小分子代谢物的影响
        3.1.1 双酪氨酸对6周小鼠体重的影响
        3.1.2 双酪氨酸对小鼠血浆和尿液样品代谢组的影响
        3.1.3 实验组小鼠血浆样品代谢组数据的模型验证和代谢物的变化
        3.1.4 实验组小鼠尿液样品代谢组数据的模型验证和代谢物的变化
        3.1.5 讨论
        3.1.6 小结
    3.2 双酪氨酸对小鼠心肌氧化还原状态的影响
        3.2.1 双酪氨酸对10周小鼠体重的影响
        3.2.2 双酪氨酸对小鼠血液和心肌ROS水平的影响
        3.2.3 双酪氨酸对小鼠血浆和心肌氧化还原状态的影响
        3.2.4 双酪氨酸对小鼠血浆和心肌蛋白氧化产物和脂质氧化产物含量的影响
        3.2.5 双酪氨酸对小鼠心肌DT沉积量的影响
        3.2.6 小结
    3.3 双酪氨酸对小鼠心肌炎症的影响
        3.3.1 双酪氨酸对小鼠血浆炎性因子含量的影响
        3.3.2 双酪氨酸对小鼠心肌炎性基因表达的影响
        3.3.3 双酪氨酸对小鼠心肌组织形态的影响
        3.3.4 双酪氨酸对小鼠心肌损伤相关指标的影响
        3.3.5 小结
    3.4 双酪氨酸对小鼠心肌能量代谢的影响
        3.4.1 双酪氨酸对小鼠血浆和心肌游离脂肪酸含量的影响
        3.4.2 双酪氨酸对小鼠心肌ATP含量的影响
        3.4.3 双酪氨酸对小鼠心肌ATP酶活性的影响
        3.4.4 双酪氨酸对小鼠心肌能量代谢调节因子基因表达的影响
        3.4.5 双酪氨酸对小鼠心肌脂肪酸代谢基因表达的影响
        3.4.6 双酪氨酸对小鼠心肌糖代谢基因表达的影响
        3.4.7 双酪氨酸对小鼠心肌三羧酸循环基因表达的影响
        3.4.8 小结
    3.5 双酪氨酸对小鼠甲状腺激素水平及其生理作用的影响
        3.5.1 双酪氨酸对小鼠血浆甲状腺激素水平的影响
        3.5.2 双酪氨酸对小鼠心肌甲状腺激素生理作用基因表达的影响
        3.5.3 重组载体质粒测序结果
        3.5.4 双荧光素酶报告基因系统活性检测结果
        3.5.5 小结
主要结论与展望
致谢
参考文献
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3663059