二甲双胍对血管内皮细胞自噬的作用

发布时间：2022-08-07 23:12

　　目的观察二甲双胍对内皮细胞自噬的影响,并探讨其可能的调控机制。方法以不同浓度二甲双胍（0、2.5、5、10、20、40 mmol/L）处理人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）24 h,并以5 mmol/L二甲双胍分别处理细胞24、48、72 h,用CCK-8法检测细胞存活率;药物处理细胞分4组:对照组（ctl）、二甲双胍组（Met）、TGFβ1组（TGF）、二甲双胍+TGFβ1处理组（M+T）,透射电镜观察各组细胞中自噬体的形成;免疫荧光和Western Blot检测自噬相关分子LC3Ⅱ、Beclin-1的表达。在原分组基础上进一步加入Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1和Hippo信号转录因子YAP阻断剂维替泊芬处理,包括XMU-MP-1处理组（XMU）,二甲双胍+XMU-MP-1处理组（M+X）、维替泊芬组（Ver）、维替泊芬+TGFβ1共处理组（V+T）、维替泊芬+XMU-MP-1共处理组（V+X）,Western Blot检测LC3Ⅱ、YAP、pYAP及其靶蛋白CTGF的表达。结果 CCK-8结果表明,... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 细胞培养和处理
    1.3 CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测
    1.4 透射电镜检测
    1.5 细胞免疫荧光
    1.6 Western blot检测
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 二甲双胍对HUVEC存活率的影响
    2.2 二甲双胍抑制TGFβ1诱导的内皮细胞内自噬体形成
    2.3 二甲双胍下调TGFβ1诱导的自噬相关分子表达
    2.4 二甲双胍阻遏TGFβ1诱导的YAP激活
3 讨论



本文编号：3671215