以ROS/ATP的比值作为药物性肝损伤检测终点的研究

发布时间：2022-08-08 20:53

　　研究背景药物性肝损伤（drug-induced liver injury,DILI）正越来越成为影响公众健康和药物开发的严重问题。临床前药物安全性评估旨在最大限度地避免对人体健康的潜在风险,同时降低药物研发成本。然而,由于存在种属差异,常规的临床前动物安全性评价实验与人体DILI存在较差的相关性。基于人源性细胞的体外肝毒性预测系统的发展,有助于解决动物实验带来的种属差异问题,并且体外试验周期短,能够实现高通量检测,并能探究药物致肝毒性的机制信息。但使用任何单一的检测终点已被证实均无法准确预测人体DILI,因此,以细胞为基础的体外多参数组合预测人体DILI,成为新药开发早期肝毒性筛选的研究趋势。有研究表明,以ROS/ATP的比值作为终点用于检测药物的肝毒性,结果具有很高的敏感性和特异性。与传统的单一终点评价药物毒性相比,这种复合型终点考虑了药物的多机制毒性作用,提高了预测的准确性;与现有的多终点组合预测系统相比,比值型终点简化了实验程序,有助于体外肝毒性的标准化预测,这对于新药开发早期候选化合物的大规模筛选具有重要意义。因此,这种复合比值型终点为体外肝毒性的标准化预测提供了新思路,具有较... 

【文章页数】：125 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩写说明对照表
第1章 绪论
    1.1 药物性肝损伤
    1.2 临床前药物肝毒性研究面临的挑战
    1.3 体外肝毒性评价研究进展
        1.3.1 药物性肝损伤的主要机制
        1.3.2 体外肝毒性评价终点
        1.3.3 体外肝毒性评价模型
    1.4 立题依据
        1.4.1 立题背景
        1.4.2 本课题的研究前提
        1.4.3 细胞模型选择依据
        1.4.4 数据分析方法选择依据
第2章 8个候选药物对HepG2细胞活力的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要试剂/试剂盒
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 待测药物
        2.1.5 主要试剂的配制
        2.1.6 待测药物的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞活力检测
        2.2.3 数据处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 4个严重肝毒性药物对HepG2细胞存活率的影响
        2.3.2 3个中度肝毒性药物对HepG2细胞存活率的影响
        2.3.3 无肝毒性药物地塞米松对HepG2细胞存活率的影响
        2.3.4 不同程度肝毒性药物对HepG2细胞存活率的影响
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 基于HepG2细胞的多参数肝毒性检测系统的建立
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 主要试剂/试剂盒
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 待测药物
        3.1.5 主要试剂的配制
        3.1.6 药物的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 ROS含量检测
        3.2.3 ATP含量检测
        3.2.4 caspase3/7含量检测
        3.2.5 GSH含量检测
        3.2.6 数据处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 两种方法检测ROS结果的比较
        3.3.2 用荧光酶标仪检测盐酸胺碘酮对HepG2细胞不同终点的影响
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 基于HepG2细胞的多参数检测系统用于肝毒性筛选
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 主要试剂/试剂盒
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 待测药物
        4.1.5 主要试剂的配制
        4.1.6 待测药物的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 ROS含量检测
        4.2.3 ATP含量检测
        4.2.4 caspase3/7含量检测
        4.2.5 GSH含量检测
        4.2.6 数据处理
    4.3 实验结果
        4.3.1 27个药物的ROS检测结果
        4.3.2 27个药物的ATP检测结果
        4.3.3 27个药物的caspase检测结果
        4.3.4 27个药物的GSH检测结果
        4.3.5 27个药物的ROS/ATP检测结果
        4.3.6 27个药物的caspase/ATP检测结果
        4.3.7 27个药物的GSH/ATP检测结果
        4.3.8 ROS、ATP、caspase及GSH预测DILI的能力比较
        4.3.9 ATP、ROS/ATP、caspase/ATP及GSH/ATP预测DILI的能力比较
        4.3.10 ROS/ATP预测DILI的性能
        4.3.11 ROS/ATP区分不同临床表型肝毒性药物的性能
    4.4 讨论
        4.4.1 27个药物对HepG2细胞不同检测终点的影响
        4.4.2 ROS/ATP可用于区分具有不同程度肝毒性的药物
        4.4.3 本实验系统与其他检测系统相比具有优越的评估性能
        4.4.4 影响本实验系统预测的因素
    4.5 本章小结
第5章 ROS/ATP的比值在hiPSCs分化的肝细胞的肝毒性检测中的应用
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验细胞
        5.1.2 主要试剂/试剂盒
        5.1.3 实验仪器
        5.1.4 待测药物
        5.1.5 主要试剂的配制
        5.1.6 待测药物的配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 ROS含量检测
        5.2.2 ATP含量检测
        5.2.3 数据处理
    5.3 实验结果
        5.3.1 不同来源的hiPSC-HLCs的质量标准
        5.3.2 候选药物对NovoCell~(TM)-Hepatocytes的影响
        5.3.3 候选药物对IxCell~(TM)-Hepatocytes的影响
        5.3.4 不同细胞模型比较
    5.4 讨论
        5.4.1 待测药物的肝毒性及检测结果
        5.4.2 hiPSC-HLCs可能有助于提高ROS/ATP检测的灵敏度
        5.4.3 hiPSC-HLCs的定向分化及面临的挑战
    5.5 本章小结
全文总结
参考文献
创新性分析
对进一步研究工作的设想和建议
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3672210