硝基呋喃类抗菌素代谢物免疫学快速检测方法的建立

发布时间：2022-08-12 22:06

　　具有潜在“三致”作用的硝基呋喃类抗菌素在国内外虽已禁用二十余年，但时至今日硝基呋喃类抗菌素及其代谢物残留仍时有检出。本文旨在基于免疫学原理，研究出硝基呋喃类代谢物的一种快速检测方法，为此，本研究的重点是先制备出灵敏度高、特异性强的单克隆抗体，然后建立间接竞争ELISA （icELISA）检测方法并对其进行优化，最后对优化条件下的icELISA进行鉴定。首先，将硝基呋喃类代谢物与乙醛酸、对醛基苯甲酸及对硝基苯甲醛进行衍生合成半抗原及标准品并用液相色谱串联四级杆飞行时间质谱仪进行鉴定；采用活泼酯法及混合酸酐法将半抗原与载体蛋白偶联合成完全抗原，并用紫外进行表征。用免疫原免疫小鼠，通过不断地免疫、血清检测筛选出效价高、抑制效果好的小鼠，取其脾脏进行细胞融合并筛选出效果最好的细胞株，制备腹水、纯化，得到单克隆抗体。建立icELISA并对包被原、标准品溶解用溶剂、标准品稀释液的pH及NaCl浓度进行了一系列的优化，将优化好的icELISA进行灵敏度、特异性、准确性的鉴定。优化结果显示，样品稀释液的pH及NaCl浓度对抗体的IC50均有较大影响。通过icELISA条件的优化，成功地将SEM、AHD... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一章 绪论
    1.1 立题背景
    1.2 硝基呋喃概述
        1.2.1 硝基呋喃类抗菌素的理化性质及药理性质
        1.2.2 硝基呋喃的代谢
        1.2.3 硝基呋喃的毒害作用及使用现状
    1.3 硝基呋喃检测方法
        1.3.1 硝基呋喃代谢物检测的样品前处理方法
        1.3.2 仪器检测方法
        1.3.3 免疫学检测方法
    1.4 本课题研究内容及意义
第二章 硝基呋喃代谢物半抗原及完全抗原的设计、合成与鉴定
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 药品与试剂
        2.2.2 主要仪器及设备
        2.2.3 主要溶液
    2.3 实验方法
        2.3.1 呋喃唑酮代谢物 3-氨基-2-恶唑烷酮 (3-Amino-2-oxazolidinone , AOZ) 的合成及鉴定
        2.3.2 半抗原、标准品的设计、合成及鉴定
        2.3.3 完全抗原的合成与鉴定
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 AOZ 的液质联用分析
        2.4.2 半抗原、标准品的鉴定
        2.4.3 完全抗原的鉴定
    2.5 小结
第三章 单克隆抗体的制备及鉴定
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 药品与试剂
        3.2.2 主要仪器及设备
        3.2.3 主要溶液的配制
        3.2.4 实验动物
        3.2.5 其他实验材料
    3.3 实验方法
        3.3.1 小鼠的免疫
        3.3.2 小鼠血清检测
        3.3.3 杂交瘤细胞株的制备
        3.3.4 单克隆抗体的大量制备
        3.3.5 单克隆抗体的纯化
        3.3.6 单克隆抗体的鉴定
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 单克隆抗体效价测定
        3.4.2 单克隆抗体亚类鉴定
    3.5 小结
第四章 间接竞争 ELISA 法的建立及优化
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 药品与试剂
        4.2.2 主要仪器及设备
        4.2.3 ELISA 溶液的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 icELISA 方法的建立
        4.3.2 icELISA 条件的优化
        4.3.3 最佳优化条件的 icELISA 方法的建立及评估
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 抗体灵敏度测定
        4.4.2 icELISA 条件的优化
        4.4.3 icELISA 方法的评估
    4.5 小结
主要结论
致谢
参考文献
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
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[4]我国食品安全风险识别、评估与管理——基于食品安全事件的实证分析[J]. 张红霞,安玉发,张文胜.  经济问题探索. 2013(06)
[5]中国食品安全问题与思考[J]. 孙宝国,王静,孙金沅.  中国食品学报. 2013(05)
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博士论文
[1]三聚氰胺单克隆抗体制备及其高灵敏快速检测技术研究[D]. 孙凤霞.江南大学 2011

硕士论文
[1]食品中四种重要过敏原酶联免疫检测方法的研究[D]. 邓小芳.江南大学 2012
[2]动物源性食品中硝基呋喃类药物残留分析研究[D]. 徐一平.江南大学 2008



本文编号：3676676