噻吩[2,3-d]嘧啶类化合物对SHP2抑制活性研究

发布时间：2022-09-17 13:10

　　目的:SHP2是整合来自不同细胞表面受体的信号与细胞内主要细胞信号传导途径的关键节点;其异常激活有可能导致血液恶性肿瘤的发生。据此,SHP2已经成为治疗血液恶性肿瘤的靶点之一。本研究目的是通过构建SHP2酶活评价体系,对实验室前期获得的噻吩[2,3-d]嘧啶类化合物进行SHP2-PTP酶活性测定,获得SHP2抑制剂,并对其进行细胞活性研究,在细胞水平上验证其对SHP2的抑制作用。最后,通过分子对接和分子动力学研究抑制剂与SHP2的作用模式。为寻找以SHP2为靶点的新型抗癌药提供新的思路。方法:1.SHP2抑制剂的活性研究:（1）建立SHP2酶活性测定体系并进行酶活性测定:将SHP2-PTP质粒转化到大肠杆菌BL21中,通过细菌扩增,IPTG诱导SHP2-PTP蛋白表达,获得足量的蛋白。然后利用Ni-NTA重力柱对蛋白进行纯化,得到较纯的SHP2-PTP蛋白。最后,以pNPP为底物,测定化合物对SHP2-PTP酶活的影响。（2）细胞活性测定:首先,对H460和Hela两种细胞系进行细胞培养,获得处于对数期生长的细胞。采用不同浓度的化合物处理H460和Hela两种细胞,共同孵育48小时。利... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、SHP2酶活性测定体系的建立和酶活性测定
    1.1 材料与方法
        1.1.1 缓冲液的配制
        1.1.2 仪器与试剂
        1.1.3 SHP2-PTP蛋白
        1.1.4 SHP2-PTP酶活性实验
    1.2 结果与讨论
        1.2.1 SHP2-PTP蛋白
        1.2.2 酶活性实验
    1.3 小结
二、化合物的细胞活性研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 所用药品和试剂、耗材
        2.1.3 主要试剂的配制
        2.1.4 细胞培养
        2.1.5 细胞增殖实验(MTT法)
        2.1.6 细胞凋亡检测
        2.1.7 Western Blot
    2.2 结果与讨论
        2.2.1 细胞增殖实验
        2.2.2 细胞凋亡实验
        2.2.3 Western Blot实验
    2.3 小结
三、分子对接、分子动力学模拟及ADMET预测
    3.1 材料与方法
        3.1.1 分子精准对接
        3.1.2 分子动力学模拟
        3.1.3 化合物的ADMET预测
    3.2 结果与讨论
        3.2.1 对接
        3.2.2 分子动力学模拟
        3.2.3 ADMET预测
    3.3 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 SHP2在造血和白血病发生中的作用
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3679285