CYP3A4和CYP1A2及CYP2E1快速免疫印迹检测方法的建立

发布时间：2022-09-27 17:01

　　目的:建立细胞色素P450酶3A4（CYP3A4）、1A2（CYP1A2）及2E1（CYP2E1）的快速免疫印迹（Western blot）检测方法。方法:培养Hep G2细胞并提取总蛋白,饲养大鼠并制备肝组织匀浆液、S9以及微粒体,以4种标本为对象分别以不同的封闭时间、抗体孵育时间和分离胶类型等常规Western blot条件设置A、B、C、D、E及F组用以考察CYP3A4的最佳检测条件;使用Western blot快速孵育仪,分别以不同的Western blot封闭和抗体孵育时间条件设置A、B、C和D、E、F及G、H、I组分别用以考察CYP3A4、CYP1A2及CYP2E1的最佳检测条件。结果:常规Western blot不同条件下,对CYP3A4的检测中C组检测灵敏度在Hep G2、肝微粒体样品检测中高于A、B、D、E及F组（P ＜0.05）,在组织匀浆、S9样品检测中C组检测灵敏度高于A、B、E组（P ＜0.05）;在使用Western blot快速孵育仪孵育条件下,对CYP3A4的检测C组灵敏度在Hep G2、肝组织匀浆及S9样品检测中高于A、B组（P ＜0.05）,在肝微粒... 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物及细胞
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 Hep G2细胞样品总蛋白的制备
        1.2.2 大鼠肝组织匀浆蛋白、S9及微粒体的制备
        1.2.3 蛋白浓度测定
        1.2.4 Western blot检测
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 CYP3A4摇床封闭孵育检测条件优化
    2.2 CYP3A4、1A2及2E1 Western blot快速孵育仪孵育检测条件的优化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3681257