优降宁对CYP3A4/3A7基因启动子和增强子区组蛋白甲基化修饰及其转录的影响

发布时间：2022-09-30 17:57

　　观察优降宁（pargyline）对细胞色素P450 3A（cytochrome P450 3A,CYP3A）亚型CYP3A4/3A7启动子及增强子区组蛋白甲基化修饰及其基因转录的影响。原代分离培养人胎肝细胞,分为空白对照组、溶媒组、优降宁低、中、高(0.6、1.2、2.4 mmol·L^-1)浓度组,Hep G2细胞用0.03、0.3、3 mmol·L^-1优降宁处理48 h,观察组蛋白甲基化修饰对CYP3A4/3A7基因表达的影响;3 mmol·L^-1优降宁处理组与对照组的HepG2细胞进行染色质免疫共沉淀,选取特异CYP3A4/3A7启动子、增强子区位点设计引物进行实时定量PCR,H3K4me2富集以input百分比表示观察富集的改变。结果表明,优降宁能促进人原代胎肝细胞、HepG2细胞增殖生长,与溶媒对照组相比,优降宁(1.2、2.4 mmol·L^-1)显著升高人原代胎肝细胞CYP3A7表达水平,且优降宁(3 mmol·L^-1)显著升高HepG2细胞CYP3A4/3A7表达水... 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
材料与方法
    药品与主要试剂
    胎儿肝脏样本
    原代胎肝细胞的分离培养[7,8]
    Hep G2细胞传代与培养
    优降宁对原代胎肝细胞及Hep G2细胞CYP3A4/3A7表达影响
    优降宁对CYP3A4/3A7启动子及增强子区组蛋白甲基化修饰及其转录的影响
        细胞培养及药物处理
        细胞的甲醛交联与超声破碎
    免疫复合物的沉淀及洗涤
    解交联、蛋白酶消化及DNA分离纯化
    CYP3A4/3A7启动子及增强子区位点的q PCR检测
    统计学方法
结果
    1人原代胎肝细胞形态观察
    2优降宁对原代人胎肝细胞和Hep G2细胞CYP3A4/3A7基因表达的影响
        2.1 Trizol法提取人原代胎肝细胞总RNA的鉴定
        2.2 Pargyline对原代人胎肝细胞和Hep G2细胞CYP3A4/3A7基因表达的影响
    3优降宁对CYP3A4/3A7启动子及增强子区组蛋白甲基化修饰状态的影响
        3.1样品超声碎断DNA片段大小检测及DNA浓度检测
        3.2 CYP3A4/3A7启动子及增强子区组蛋白甲基化修饰状态
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]异鼠李素对CYP3A4的调节及药物相互作用分析[J]. 丁丽丽,张晶晶,窦薇.  药学学报. 2012(08)



本文编号：3684007