透明质酸修饰/共载金丝桃素和乏氧诱导因子1α-siRNA的双靶向纳米粒的制备及评价

发布时间：2022-12-06 03:14

　　本研究拟构建共载针对乏氧诱导因子1α （HIF1α）的siRNA及具有坏死组织亲和性的金丝桃素的PLGA-PEI纳米粒,并进行透明质酸（HA）修饰,研究其理化性质的同时评价该载体对肿瘤的体内外靶向性,以期研制出一种高效、低毒、稳定的靶向放疗增敏药物。 第一部分乏氧细胞模型制作及针对乏氧诱导因子1α （HIF-1α）的siRNA的构建和筛选：利用western blot方法检测出最佳的使鼻咽癌细胞CNE2乏氧的二氯化钴浓度,以模拟乏氧细胞的状态,为接下来的实验创造最佳条件。western blot结果显示细胞内加入150μmol/l的二氧化钴对鼻咽癌细胞CNE2的HIF-1α表达抑制效果最佳。同时,设计针对乏氧诱导因子1α （HIF1α）表达的6对（siRNA1217,siRNA1612,siRNA2258,siRNA2752, siRNA3724,siRNA3168）及一条阴性对照siRNA（称为NC）。在Lipofectamine2000介导下转染人鼻咽癌细胞系CNE2。同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中HIF-1α含量,以β-actin蛋白做内参照... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
目录
第一章 ：前言
第二章 ：乏氧模型建立及HIF-1α-siRNA有效干扰序列筛选
    一. 仪器与试药
        1.1 仪器
        1.2 主要试药
    二. 实验方法
        2.1 乏氧细胞模型的构建
        2.2 有效干扰HIF-1α的siRNA序列筛选
        2.3 统计学分析
    三. 结果与讨论
        3.1 乏氧细胞模型的制作
        3.2 HIF-1α-siRNA有效干扰序列筛选
    四. 小结
第三章 透明质酸修饰载金丝桃素纳米粒的制备及评价
    一. 仪器与试药
        1.1 仪器
        1.2 试药
    二. 实验方法
        2.1 纳米粒的制备
        2.2 纳米粒的外观考察
        2.3 纳米粒的形态学考察
        2.4 纳米粒的粒径和电位测定及透明质酸投药量的影响
        2.5 纳米粒的电泳考察
        2.6 细胞毒性试验
        2.7 透明质酸对纳米粒转染效率的影响
    三. 结果与讨论
        3.1 三种纳米粒的外观考察
        3.2 纳米粒的显微形态学表征结果
        3.3 纳米粒的粒径、电位图
        3.4 透明质酸投药量对纳米粒粒径、电位的影响
        3.5 电泳考察结果
        3.6 MTT结果
        3.7 透明质酸对纳米粒转染效率的影响
    四. 本章小结
第四章 ：载金丝桃素纳米粒的体外靶向性考察及其体内坏死亲和性初探
    一. 仪器与试药
        1.1 仪器
        1.2 试药与材料
    二. 实验方法
        2.1 细胞的复苏与培养
        2.2 细胞的传代培养
        2.3 激光共聚焦显微镜观察siRNA胞内转染效果
        2.4 细胞转染考察
        2.5 细胞摄取考察
        2.6 受体抑制实验
        2.7 在体靶向性考察
    三. 结果与讨论
        3.1 激光共聚焦显微镜观察siRNA胞内转染效果
        3.2 PLGA-PEI纳米粒及HA-PLGA-PEI纳米粒的细胞转染结果
        3.3 载金丝桃素的PLGA-PEI细胞摄取结果
        3.4 受体抑制实验
        3.5 体内靶向性考察
    四. 本章小结
第五章 ：结论与展望
参考文献
致谢
作者在读期间所发表及待发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]二氯化钴对胃癌细胞SGC7901凋亡和增殖的影响[J]. 顾存林,耿排力,吕有勇.  青海医学院学报. 2012(02)
[2]替拉扎明调节乏氧诱导鼻咽癌细胞HIF-1α和OPN mRNA的表达及其对放射增敏的作用[J]. 徐鹏,黄建鸣,任源,查晓,邓碧芳,吴俊辉,郎锦义.  癌症. 2010(02)
[3]黏附分子CD44与恶性瘤关系的研究进展[J]. 钱皓,凌沛学,王凤山,张天民.  中国生化药物杂志. 2007(03)
[4]聚丙交酯乙交酯纳米粒的制备及生物学效能的研究[J]. 张蕾,张阳德,翟登高,潘一峰.  中国现代医学杂志. 2007(11)
[5]注射用载胸苷激酶基因质粒PLGA纳米粒的质量研究[J]. 何勤,刘戟,徐超群,张志荣.  中国医药工业杂志. 2006(10)
[6]透明质酸及其钠盐在药物制剂中的应用[J]. 王豫辉.  食品与药品. 2005(08)
[7]金丝桃素光动力学疗法与其诱导细胞凋亡、抗凋亡信号转导系统[J]. 白洁,杨得坡.  中草药. 2004(01)



本文编号：3710944