AWRK6改善胰岛素抵抗的作用及机制研究

发布时间：2022-12-07 17:42

　　胰岛素抵抗（IR）是指胰岛素产生作用的敏感性及反应性的相对降低,机体为维持正常浓度的葡萄糖,代偿性地分泌胰岛素,最终导致高胰岛素血症的发生。IR是诱发二型糖尿病（T2DM）发生发展的核心病理机制,有研究结果显示,IR是比T2DM更为早期的机体生理异常表现,它在促使T2DM形成过程中具有不可替代的作用。AWRK6（SWVGKHGKKFGLKKHKKH）是一种新型生物活性肽,是东北林蛙皮肤抗菌肽Dybowskin-2CDYa（SAVGRHGRRFGLRKH RKH）经替换6个碱基优化改造的新型抗菌肽。前期研究表明,AWRK6能够促进MIN6细胞分泌胰岛素,是新型GLP-1受体激动剂,对于T2DM小鼠有显著的治疗作用,其作用机制与Exendin-4相似。本研究在体外采用高浓度胰岛素处理HepG2细胞,建立IR细胞模型,并筛选了AWRK6及阳性药Exendin-4的最佳作用浓度。利用GOD-POD法检测空白组、IR组、Exendin-4阳性对照组和AWRK6实验组HepG2细胞葡萄糖消耗量,初步探究了AWRK6对IR的改善作用。同时我们选用雄性昆明小鼠,随机分成空白组（15只）和HFD模型组（... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 胰岛素抵抗与疾病
    1.3 胰岛素抵抗相关信号通路
    1.4 促胰岛素分泌肽
    1.5 抗菌肽AWRK6
    1.6 本文的目的及意义
第2章 AWRK6 对胰岛素抵抗的HepG2 细胞的改善作用
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验仪器和设备
        2.2.2 实验所用主要试剂
        2.2.3 实验试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 HepG2 细胞复苏
        2.3.2 HepG2 细胞传代
        2.3.3 HepG2 细胞冻存
        2.3.4 胰岛素对细胞存活率的影响
        2.3.5 MTT法检测细胞存活率
        2.3.6 HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的建立
        2.3.7 葡萄糖含量的测定
        2.3.8 AWRK6 浓度的筛选
        2.3.9 Exendin-4 浓度的筛选
        2.3.10 HepG2 细胞的处理
        2.3.11 统计方法
    2.4 实验结果
        2.4.1 胰岛素加药浓度及时间的筛选
        2.4.2 AWRK6 加药浓度的筛选
        2.4.3 Exendin-4 加药浓度的筛选
        2.4.4 AWRK6对IR-HepG2 的作用
    2.5 本章小结
第3章 AWRK6 对胰岛素抵抗模型小鼠的改善作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验仪器和设备
        3.2.2 实验所用主要试剂
        3.2.3 实验试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 实验动物的准备
        3.3.2 胰岛素抵抗动物模型的建立
        3.3.3 胰岛素抵抗动物模型的验证
        3.3.4 药物处理
        3.3.5 口服葡萄糖耐量试验
        3.3.6 胰岛素耐量试验
        3.3.7 小鼠血清及组织的提取
        3.3.8 组织切片染色方法
        3.3.9 生化指标
        3.3.10 统计方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 胰岛素抵抗动物模型的验证
        3.4.2 小鼠体重变化
        3.4.3 小鼠空腹血糖变化
        3.4.4 小鼠肝脏系数
        3.4.5 小鼠脂肪系数
        3.4.6 小鼠口服葡萄糖耐量试验
        3.4.7 小鼠胰岛素耐量试验
        3.4.8 小鼠肝脏HE染色
        3.4.9 小鼠肝脏油红O染色
        3.4.10 小鼠血清胰岛素
        3.4.11 小鼠血清胰高血糖素
        3.4.12 小鼠胰岛素抵抗指数
        3.4.13 小鼠胰岛素敏感指数
        3.4.14 小鼠糖化血红蛋白
        3.4.15 小鼠血清甘油三酯
        3.4.16 小鼠血清总胆固醇
        3.4.17 小鼠血清高密度脂蛋白
        3.4.18 小鼠血清低密度脂蛋白
        3.4.19 小鼠肝糖原
        3.4.20 小鼠肌糖原
    3.5 本章小结
第4章 AWRK6 改善胰岛素抵抗的机制研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验仪器和设备
        4.2.2 实验所用主要试剂
        4.2.3 实验试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 HepG2 细胞的处理
        4.3.2 细胞蛋白的提取
        4.3.3 组织蛋白的提取
        4.3.4 蛋白浓度的测定
        4.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳
        4.3.6 统计方法
    4.4 实验结果
        4.4.1 AWRK6对PI3K、P-PI3K蛋白表达的影响
        4.4.2 AWRK6对AKT、P-AKT蛋白表达的影响
        4.4.3 AWRK6对GLUT2 蛋白表达的影响
    4.5 本章小结
讨论
结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]AWRK6改善HepG2细胞胰岛素抵抗的初步研究[J]. 金莉莉,张含玉,刘丽,黄景文,王秋雨.  辽宁大学学报(自然科学版). 2018(03)
[2]基于PI3K/Akt信号通路的中医药改善胰岛素抵抗的研究进展[J]. 方玲,张琪,魏恩韬,贾紫珮.  中国医药导报. 2018(23)

硕士论文
[1]抗菌肽AWRK6中和内毒素及抗败血症活性[D]. 王欢.辽宁大学 2015



本文编号：3712561