Abro1敲除小鼠抵抗E.coil诱导的急性肺损伤及机制研究
发布时间：2023-01-28 19:56
目的急性呼吸窘迫综合症（Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS）和急性肺损伤（Acute Lung Injury,ALI）是一种常发生在重症病人身上的急性呼吸系统疾病,死亡率较高。ARDS/ALI发病及调控机制复杂,救治比较困难,临床上多采用机械通气、促进炎症消失等手段遏制ARDS/ALI发展进程。近年来随着分子生物学研究技术的进步以及对ARDS/ALI发病机制的深入研究,应用生物靶向治疗和基因治疗逐渐成为可能。Abro1（Abraxas Brother1）是去泛素化酶BRISC复合体的重要组成成分,参与DNA损伤、免疫应答及染色体复制等生物学过程的调控。本论文通过研究Abro1在急性肺损伤过程中的作用,揭示其参与急性肺损伤发病的分子机制,为急性肺损伤的防治提供潜在的药物靶点。方法分别取生理状态下野生小鼠和Abro1敲除小鼠尾静脉血,检测外周血象;采用复合酶消化法和流式细胞术分析肺脏组织中免疫细胞的比例和数目;采用肺部气溶胶给药系统建立E.coli和LPS诱导的急性肺损伤模型并检测小鼠存活状态;应用HE染色观察肺组织病理改变;采用计数微球计数支...
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 导论
1.1 研究背景
1.2 文献综述
1.2.1 ABRO1的结构
1.2.2 ABRO1的功能
1.2.3 急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合症(ALI/ARDS)
1.3 研究方法
1.3.1 文献分析法
1.3.2 实验研究
1.3.3 统计学分析法
1.4 研究内容
第二章 ABRO1~(-/-)小鼠生理状态免疫分析
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器设备
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 主要试剂配制
2.2.2 外周血象分析
2.2.3 支气管肺泡灌洗液
2.2.4 BCA测定蛋白含量
2.2.5 小鼠肺组织免疫细胞分离与纯化
2.2.6 小鼠肺部免疫细胞流式分析
2.2.7 细胞计数
2.2.8 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 敲除Abro1不影响外周血象
2.3.2 敲除Abro1不改变肺泡灌洗液和肺组织免疫细胞的组成
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Abro1敲除小鼠抵抗E.coli诱导的急性肺损伤及机制研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器设备
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 急性肺损伤动物模型的建立
3.2.2 肺脏组织HE染色
3.2.3 肺脏组织蛋白提取
3.2.4 Westernblot检测
3.2.5 支气管肺泡灌洗液
3.2.6 流式细胞术检测
3.2.7 肺脏组织MPO检测
3.2.8 细胞因子检测
3.2.9 Real-timePCR检测小鼠肺脏中炎症因子mRNA表达
3.2.10 肺脏组织SOD检测
3.2.11 肺脏组织总抗氧化能力检测
3.2.12 肺脏组织湿干比重检测
3.2.13 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 建立E.coli诱发的急性肺损伤模型
3.3.2 敲除Abro1提高小鼠存活率,减轻肺组织损伤
3.3.3 E.coli刺激肺组织中Abro1的表达先上升后下降
3.3.4 敲除Abro1不影响肺的抗氧化能力
3.3.5 敲除Abro1不改变肺泡壁的通透性
3.3.6 敲除Abro1降低PMN的募集,不影响其功能
3.3.7 敲除Abro1降低血清中炎症因子的释放
3.3.8 敲除Abro1降低BALF中炎症因子、趋化因子的释放
3.3.9 敲除Abro1降低LPS引起的肺部损伤
3.3.10 敲除Abro1降低LPS引起的炎症因子释放
3.3.11 敲除Abro1降低炎症小体的活化
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3732629
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 导论
1.1 研究背景
1.2 文献综述
1.2.1 ABRO1的结构
1.2.2 ABRO1的功能
1.2.3 急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合症(ALI/ARDS)
1.3 研究方法
1.3.1 文献分析法
1.3.2 实验研究
1.3.3 统计学分析法
1.4 研究内容
第二章 ABRO1~(-/-)小鼠生理状态免疫分析
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器设备
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 主要试剂配制
2.2.2 外周血象分析
2.2.3 支气管肺泡灌洗液
2.2.4 BCA测定蛋白含量
2.2.5 小鼠肺组织免疫细胞分离与纯化
2.2.6 小鼠肺部免疫细胞流式分析
2.2.7 细胞计数
2.2.8 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 敲除Abro1不影响外周血象
2.3.2 敲除Abro1不改变肺泡灌洗液和肺组织免疫细胞的组成
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Abro1敲除小鼠抵抗E.coli诱导的急性肺损伤及机制研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器设备
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 急性肺损伤动物模型的建立
3.2.2 肺脏组织HE染色
3.2.3 肺脏组织蛋白提取
3.2.4 Westernblot检测
3.2.5 支气管肺泡灌洗液
3.2.6 流式细胞术检测
3.2.7 肺脏组织MPO检测
3.2.8 细胞因子检测
3.2.9 Real-timePCR检测小鼠肺脏中炎症因子mRNA表达
3.2.10 肺脏组织SOD检测
3.2.11 肺脏组织总抗氧化能力检测
3.2.12 肺脏组织湿干比重检测
3.2.13 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 建立E.coli诱发的急性肺损伤模型
3.3.2 敲除Abro1提高小鼠存活率,减轻肺组织损伤
3.3.3 E.coli刺激肺组织中Abro1的表达先上升后下降
3.3.4 敲除Abro1不影响肺的抗氧化能力
3.3.5 敲除Abro1不改变肺泡壁的通透性
3.3.6 敲除Abro1降低PMN的募集,不影响其功能
3.3.7 敲除Abro1降低血清中炎症因子的释放
3.3.8 敲除Abro1降低BALF中炎症因子、趋化因子的释放
3.3.9 敲除Abro1降低LPS引起的肺部损伤
3.3.10 敲除Abro1降低LPS引起的炎症因子释放
3.3.11 敲除Abro1降低炎症小体的活化
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3732629
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3732629.html
