5-羟甲基糠醛抗炎作用和机制及对皮肤创面修复的研究
发布时间：2023-01-30 10:27
皮肤创面修复是一项具有挑战性的医学难题,设计和开发快速有效地方法来治疗创面是非常有必要的。创面修复一般而言涉及4个阶段,止血阶段,炎症反应,增殖及重塑阶段;炎症反应和细胞增殖是人为可干预并有效促进创面愈合的阶段。5-羟甲基糠醛具有多种有益的生物学功能,如抗氧化、抗急性低压缺氧和心脏保护功能等,但较少文献研究其抗炎及应用于创面修复方面。本文主要对5-羟甲基糠醛的抗炎作用及药理机制进行探究,同时以聚乙烯醇/海藻酸钠水凝胶载体,探究5-羟甲基糠醛在体外和体内创面修复的效果和机理。1.本文以LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞为炎症模型,探究5-羟甲基糠醛的抗炎效果和相关机制。结果显示:5-羟甲基糠醛以浓度依赖性的方式降低一氧化氮（NO）,前列腺素E2（PGE2）和促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）的含量。同时,经5-羟甲基糠醛预处理的细胞能显著下调两种主要炎症介质:一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2）的mRNA表达,并抑制促炎细胞因子mRNA的表达。5-羟甲基糠醛通过抑制细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）,c-Jun N末端激酶（JNK）,IκBα,NF-κ...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 炎症生理学和治疗方法
1.2 皮肤创面修复过程
1.2.1 创面愈合过程
1.2.2 巨噬细胞在创面修复过程中的作用
1.2.3 皮肤成纤维细胞在创面修复过程中的作用
1.3 创面敷料研究进展
1.3.1 传统敷料
1.3.2 水凝胶敷料
1.3.2.1 水凝胶的制备
1.3.2.2 水凝胶的材料
1.3.3 其他创面敷料
1.4 5-羟甲基糠醛
1.5 研究意义
1.6 研究内容
第二章 5-羟甲基糠醛的抗炎作用及机制研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 细胞系
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 实验操作步骤流程
2.3.2 细胞培养
2.3.2.1 细胞复苏
2.3.2.2 细胞传代
2.3.2.3 细胞冻存
2.3.3 细胞活性检测
2.3.4 细胞培养液NO含量检测
2.3.5 细胞炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)和PGE2含量的测定
2.3.5.1 细胞上清液的收集
2.3.5.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)
2.3.6 实时荧光定量PCR法检测RAW264.7巨噬细胞的mRNA的表达量
2.3.6.1 RAW264.7巨噬细胞总RNA的提取
2.3.6.3 逆转录合成cDNA
2.3.6.4 实时荧光定量PCR
2.3.7 细胞内活性氧(ROS)检测
2.3.8 Western blot检测蛋白质的相对含量表达
2.3.8.1 细胞处理和收集步骤
2.3.8.2 BCA法检测蛋白质浓度
2.3.8.3 SDS-PAGE蛋白质电泳
2.3.8.4 转膜
2.3.8.5 蛋白质印记检测
2.3.9 p65核易位免疫荧光染色
2.3.10 统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 5-HMF的细胞毒性检测
2.4.2 5-HMF对NO和PGE2的含量的作用
2.4.3 5-HMF对炎症细胞因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)表达的影响
2.4.4 5-HMF对iNOS,COX-2,TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响
2.4.5 5-HMF对细胞活性氧的作用
2.4.6 5-HMF对MAPK,Akt/ mTOR和NF-κB信号通路的影响
2.4.7 5-HMF对NF-κB p65核易位的影响
2.5 本章小结
第三章 5-羟甲基糠醛对人皮肤成纤维细胞增殖及迁移的影响
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 细胞系
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.2.4 实验试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 实验操作步骤流程
3.3.2 HSF细胞培养
3.3.2.1 细胞复苏
3.3.2.2 细胞传代
3.3.2.3 细胞冻存
3.3.3 MTT法检测5-HMF对皮肤成纤维细胞的增殖影响
3.3.4 流式细胞术检测5-HMF对经CFSE标记人皮肤成纤维细胞的增殖
3.3.5 划痕实验
3.3.6 Transwell小室迁移实验
3.3.7 羟脯氨酸含量的测定
3.3.8 实时荧光定量PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ mRNA的表达
3.3.8.1 HSF细胞总RNA的提取
3.3.8.2 总RNA浓度及纯度的测定
3.3.8.3 逆转录合成cDNA
3.3.8.4 实时荧光定量PCR
3.3.9 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 5-HMF对皮肤成纤维细胞增殖的影响
3.4.2 流式细胞术测试5-HMF对CFSE标记皮肤成纤维细胞影响
3.4.3 划痕实验
3.4.4 Transwell小室迁移实验
3.4.5 药物5-HMF对HSF分泌羟脯氨酸的影响
3.4.6 qPCR法检测皮肤成纤维细胞胶原的mRNA表达量
3.5 本章小结
第四章 载药聚乙烯醇/海藻酸钠水凝胶创面修复的研究
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 细胞系
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 实验操作步骤流程
4.3.2 水凝胶的制备
4.3.3 纳米银的制备和表征
4.3.4 PVA/海藻酸钠水凝胶的表征测试
4.3.4.1 凝胶分数的测定
4.3.4.2 水凝胶溶胀性能和含水量的测定
4.3.4.3 水凝胶形貌观察
4.3.4.4 水凝胶傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析
4.3.4.5 水凝胶的热分析
4.3.4.6 水凝胶的机械性能分析
4.3.4.6 载药水凝胶的药物释放测试
4.3.4.7 水凝胶浸提液的生物相容性测试
4.3.4.8 水凝胶的抑菌测试
4.3.4.9 SEM观察载Ag-NPs的PVA/海藻酸钠水凝胶
4.3.4.10 SEM观察细胞在水凝胶上粘附情况
4.3.5 载药水凝胶创面敷料体内修复研究
4.3.5.1 创面模型建立
4.3.5.2 创面修复
4.3.5.3 组织包埋与切片
4.3.5.4 HE染色
4.3.5.5 Masson染色
4.3.5.6 天狼猩红染色
4.3.5.7 VEGF和CD31免疫组化染色
4.3.6 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 纳米银的表征
4.4.2 水凝胶的表征
4.4.2.1 水凝胶的凝胶分数、含水量、溶胀曲线
4.4.2.2 水凝胶的形貌观察
4.4.2.3 水凝胶FT-IR分析
4.4.2.4 水凝胶的热分析
4.4.2.5 水凝胶的机械性能
4.4.2.6 水凝胶的药物释放曲线
4.4.2.7 水凝胶的生物相容性测试
4.4.2.8 水凝胶的抑菌效果
4.4.2.9 Ag-NPs水凝胶表面形貌和EDS分析
4.4.2.10 水凝胶的细胞粘附情况
4.4.3 体内创面修复
4.4.3.1 创面愈合率
4.4.3.2 HE染色
4.4.3.3 Masson和天狼猩红染色
4.4.3.4 VEGF免疫组化染色
4.4.3.5 CD31免疫组化染色
4.4.4 本章小结
结论与展望
结论
创新之处
展望
参考文献
攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3732977
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 炎症生理学和治疗方法
1.2 皮肤创面修复过程
1.2.1 创面愈合过程
1.2.2 巨噬细胞在创面修复过程中的作用
1.2.3 皮肤成纤维细胞在创面修复过程中的作用
1.3 创面敷料研究进展
1.3.1 传统敷料
1.3.2 水凝胶敷料
1.3.2.1 水凝胶的制备
1.3.2.2 水凝胶的材料
1.3.3 其他创面敷料
1.4 5-羟甲基糠醛
1.5 研究意义
1.6 研究内容
第二章 5-羟甲基糠醛的抗炎作用及机制研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 细胞系
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 实验操作步骤流程
2.3.2 细胞培养
2.3.2.1 细胞复苏
2.3.2.2 细胞传代
2.3.2.3 细胞冻存
2.3.3 细胞活性检测
2.3.4 细胞培养液NO含量检测
2.3.5 细胞炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)和PGE2含量的测定
2.3.5.1 细胞上清液的收集
2.3.5.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)
2.3.6 实时荧光定量PCR法检测RAW264.7巨噬细胞的mRNA的表达量
2.3.6.1 RAW264.7巨噬细胞总RNA的提取
2.3.6.3 逆转录合成cDNA
2.3.6.4 实时荧光定量PCR
2.3.7 细胞内活性氧(ROS)检测
2.3.8 Western blot检测蛋白质的相对含量表达
2.3.8.1 细胞处理和收集步骤
2.3.8.2 BCA法检测蛋白质浓度
2.3.8.3 SDS-PAGE蛋白质电泳
2.3.8.4 转膜
2.3.8.5 蛋白质印记检测
2.3.9 p65核易位免疫荧光染色
2.3.10 统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 5-HMF的细胞毒性检测
2.4.2 5-HMF对NO和PGE2的含量的作用
2.4.3 5-HMF对炎症细胞因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)表达的影响
2.4.4 5-HMF对iNOS,COX-2,TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响
2.4.5 5-HMF对细胞活性氧的作用
2.4.6 5-HMF对MAPK,Akt/ mTOR和NF-κB信号通路的影响
2.4.7 5-HMF对NF-κB p65核易位的影响
2.5 本章小结
第三章 5-羟甲基糠醛对人皮肤成纤维细胞增殖及迁移的影响
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 细胞系
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.2.4 实验试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 实验操作步骤流程
3.3.2 HSF细胞培养
3.3.2.1 细胞复苏
3.3.2.2 细胞传代
3.3.2.3 细胞冻存
3.3.3 MTT法检测5-HMF对皮肤成纤维细胞的增殖影响
3.3.4 流式细胞术检测5-HMF对经CFSE标记人皮肤成纤维细胞的增殖
3.3.5 划痕实验
3.3.6 Transwell小室迁移实验
3.3.7 羟脯氨酸含量的测定
3.3.8 实时荧光定量PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ mRNA的表达
3.3.8.1 HSF细胞总RNA的提取
3.3.8.2 总RNA浓度及纯度的测定
3.3.8.3 逆转录合成cDNA
3.3.8.4 实时荧光定量PCR
3.3.9 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 5-HMF对皮肤成纤维细胞增殖的影响
3.4.2 流式细胞术测试5-HMF对CFSE标记皮肤成纤维细胞影响
3.4.3 划痕实验
3.4.4 Transwell小室迁移实验
3.4.5 药物5-HMF对HSF分泌羟脯氨酸的影响
3.4.6 qPCR法检测皮肤成纤维细胞胶原的mRNA表达量
3.5 本章小结
第四章 载药聚乙烯醇/海藻酸钠水凝胶创面修复的研究
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 细胞系
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 实验操作步骤流程
4.3.2 水凝胶的制备
4.3.3 纳米银的制备和表征
4.3.4 PVA/海藻酸钠水凝胶的表征测试
4.3.4.1 凝胶分数的测定
4.3.4.2 水凝胶溶胀性能和含水量的测定
4.3.4.3 水凝胶形貌观察
4.3.4.4 水凝胶傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析
4.3.4.5 水凝胶的热分析
4.3.4.6 水凝胶的机械性能分析
4.3.4.6 载药水凝胶的药物释放测试
4.3.4.7 水凝胶浸提液的生物相容性测试
4.3.4.8 水凝胶的抑菌测试
4.3.4.9 SEM观察载Ag-NPs的PVA/海藻酸钠水凝胶
4.3.4.10 SEM观察细胞在水凝胶上粘附情况
4.3.5 载药水凝胶创面敷料体内修复研究
4.3.5.1 创面模型建立
4.3.5.2 创面修复
4.3.5.3 组织包埋与切片
4.3.5.4 HE染色
4.3.5.5 Masson染色
4.3.5.6 天狼猩红染色
4.3.5.7 VEGF和CD31免疫组化染色
4.3.6 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 纳米银的表征
4.4.2 水凝胶的表征
4.4.2.1 水凝胶的凝胶分数、含水量、溶胀曲线
4.4.2.2 水凝胶的形貌观察
4.4.2.3 水凝胶FT-IR分析
4.4.2.4 水凝胶的热分析
4.4.2.5 水凝胶的机械性能
4.4.2.6 水凝胶的药物释放曲线
4.4.2.7 水凝胶的生物相容性测试
4.4.2.8 水凝胶的抑菌效果
4.4.2.9 Ag-NPs水凝胶表面形貌和EDS分析
4.4.2.10 水凝胶的细胞粘附情况
4.4.3 体内创面修复
4.4.3.1 创面愈合率
4.4.3.2 HE染色
4.4.3.3 Masson和天狼猩红染色
4.4.3.4 VEGF免疫组化染色
4.4.3.5 CD31免疫组化染色
4.4.4 本章小结
结论与展望
结论
创新之处
展望
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