生物催化不对称合成非天然氨基酸（S）-2-环丙基甘氨酸

发布时间：2023-01-30 15:05

　　非天然手性氨基酸（S）-2-环丙基甘氨酸具有广泛的生理活性,被广泛应用于多肽类似物的合成和新药开发,如大环饥饿激素受体拮抗剂、缓激肽B1受体拮抗剂、纺锤体驱动蛋白抑制剂,可用于抗菌、止痛、抗癌、抗惊厥和神经退行性疾病的治疗。因而发展（S）-2-环丙基甘氨酸有十分重要的学术价值和应用前景。目前用于（S）-2-环丙基甘氨酸不对称合成的方法主要有:化学法、拆分法和生物法。相比传统的化学合成法,生物催化合成路线绿色环保,成为具有潜力的合成方法。现有的生物催化不对称合成（S）-2-环丙基甘氨酸主要是通过酶偶联法来实现的,羰基还原胺化酶和辅酶再生酶在不同的菌体中表达,在催化过程中,底物、产物以及辅酶必须通过细菌细胞膜进行细胞内外的物质扩散以及细胞间的物质交换才能保证生物转化过程的进行,传质阻力使物质扩散及交换所需时间延长,催化效率下降。针对此情况,本课题拟利用基因工程技术,将表达羰基还原胺化酶的基因与表达辅酶再生酶的基因通过柔性连接子连接,形成具有羰基还原胺化活性和辅酶再生活性的单链多肽,从而实现在单细胞中表达具有双活性中心的双功能融合酶。实现羰基不对称还原胺化和辅酶原位再生同时进行并循环往复,提... 

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重组酶表达载体的构建
    1 实验材料
        1.1 实验仪器
        1.2 实验试剂
    2 实验方法
        2.1 重组质粒构建及扩增
        2.2 重组质粒提取及酶切电泳分析
        2.3 重组质粒转化
        2.4 重组酶表达及表达条件的优化
        2.5 蛋白浓度测定及目标蛋白的纯化
        2.6 酶活力测定
    3 结果与讨论
        3.1 重组质粒构建及分析
        3.2 重组酶表达及表达条件优化
        3.3 Bradford 法测定蛋白质浓度
        3.4 目标蛋白的纯化
    4 本章小结
第二部分 重组酶的酶学性质表征
    1 实验材料
        1.1 实验仪器
        1.2 实验试剂
    2 实验方法
        2.1 温度对酶活力的影响
        2.2 pH对酶活力的影响
        2.3 热稳定性研究
        2.4 动力学参数的测定
    3 结果与讨论
        3.1 温度对酶活力的影响
        3.2 pH对酶活力的影响
        3.3 热稳定性研究
        3.4 动力学参数的测定
    4 本章小结
第三部分 重组全细胞催化不对称合成(S)-2-环丙基甘氨酸
    1 实验材料
        1.1 实验仪器
        1.2 实验试剂
    2 实验方法
        2.1 环丙基乙醛酸钾的制备
        2.2 重组全细胞催化合成(S)-2-环丙基甘氨酸
        2.3 生物转化条件的优化
        2.4 产物结构构型分析和转化率测定
    3 结果与讨论
        3.1 重组全细胞催化合成(S)-2-环丙基甘氨酸
        3.2 生物转化条件的优化
        3.3 产物结构构型分析和转化率测定
    4 本章小结
全文总结
本文创新点和特色
参考文献
附图
文献综述:非天然手性氨基酸(S)-2-环丙基甘氨酸的合成研究进展
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表文章情况


【参考文献】：
期刊论文
[1](R)-、（S）-羰基还原酶在酿酒酵母中的表达和亚细胞定位[J]. 张荣珍,徐岩,王珊珊,张波涛,耿亚维.  微生物学报. 2011(06)

硕士论文
[1]酶偶联法不对称还原潜手性β-酮酯类化合物的研究[D]. 陈星星.江南大学 2012



本文编号：3733185