孤儿核受体Nur77调控PD-L1的作用与机制研究

发布时间：2023-02-01 21:04

　　核受体Nur77（TR3）由即刻早期基因NR4A1编码,在机体免疫调控,肿瘤发生、发展中发挥重要功能。程序性死亡配体1（PD-L1）是一种40 kDa的跨膜蛋白,在多种恶性肿瘤中高度表达,与肿瘤不良预后密切相关。PD-L1与受体PD-1相互作用,抑制NK细胞、T细胞等免疫细胞的活化、增殖,使其功能发生紊乱和枯竭,从而抑制其对肿瘤的杀伤,使肿瘤发生免疫逃逸。虽然Nur77和PD-L1都在免疫调节中发挥重要作用,但它们之间的关系还没有得到很好的研究。在本课题中我们重点研究了 Nur77对PD-L1的调控。首先,我们检测了不同乳腺癌细胞中Nur77和PD-L1的表达,发现Nur77和PD-L1的表达存在明显的负相关性。接下来,通过siRNA技术在MDA-MB-231细胞中敲低Nur77,发现PD-L1的表达明显上调,说明在乳腺癌细胞中Nur77可以负向调控PD-L1的表达。在HeLa细胞中,利用siRNA敲低或用Crispr技术敲除Nur77,PD-L1的表达和mRNA水平均明显上调;过表达Nur77,PD-L1的表达显著下调。为了进一步研究Nur77调控PD-L1的生物学功能,我们开展了自... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词
第一章 前言
    1. 核受体
        1.1 核受体的结构和功能
    2. 孤儿核受体Nur77
        2.1 孤儿核受体Nur77的结构
        2.2 孤儿核受体Nur77的功能
            2.2.1 Nur77的免疫功能
            2.2.2 Nur77在肿瘤中的生物学功能
        2.3 Nur77和肿瘤免疫
            2.3.1 肿瘤免疫
            2.3.2 Nur77和肿瘤免疫密切相关
    3. 程序性死亡配体-1和程序性死亡受体-1
        3.1 程序性死亡配体-1 PD-L1
        3.2 程序性死亡受体PD-1
        3.3 PD-L1/PD-1的信号通路
        3.4 PD-L1/PD-1和肿瘤免疫逃逸
        3.5 基于PD-L1/PD-1的肿瘤免疫策略
        3.6 IFN-γ和PD-L1
    4. 本文研究的目的和意义
第二章 材料与方法
    1. 实验材料
        1.1细胞株质粒和菌株
        1.2 主要实验仪器
        1.3 主要试剂
            1.3.1 主要实验试剂
            1.3.2 干扰序列
            1.3.3 引物
        1.4 主要的实验配方
            1.4.1 SDS-PAGE变性胶
            1.4.2 细胞培养所需的溶液配方
            1.4.3 Western BLot和CO-IP相关溶液配方
            1.4.4 分子克隆所需配方
            1.4.5 稀释抗体的配方
    2. 实验方法
        2.1 蛋白印迹法
        2.2 构建重组质粒
            2.2.1 制备DH5a感受态细菌
            2.2.2 PCR基因扩增
            2.2.3 琼脂糖凝胶电泳分析
            2.2.4 胶回收
            2.2.5 目的片段和空载体的酶切
            2.2.6 目的片段和载体回收
            2.2.7 酶切后片段的酶连
            2.2.8 重组质粒的转化
            2.2.9 验证重组质粒
        2.3 细胞培养涉及的相关实验方法
            2.3.1 细胞的传代铺板冻存和复苏
            2.3.2 细胞转染
            2.3.3 细胞计数法
        2.4 MTT法即NK-92 MI对HeLa细胞的杀伤功能检测
        2.5 实时荧光定量PCR法
        2.6 核质分离实验
        2.7 免疫共沉淀实验
        2.8 统计分析
第三章 结果与分析
    1. 乳腺癌细胞中Nur77对PD-L1的表达调控
        1.1 Nur77和PD-L1在不同乳腺癌细胞中的表达
        1.2 乳腺癌细胞MDA-MB-231中Nur77调控PD-L1的表达
    2. 宫颈癌细胞HeLa中Nur77对PD-L1的表达调控
        2.1 宫颈癌细胞HeLa中Nur77调控PD-L1的表达
        2.2 宫颈癌细胞HeLa中Nur77调控PD-L1的转录水平
        2.3 HeLa细胞中敲低Nur77后对NK-92 MI的免疫杀伤功能影响
        2.4 Nur77不影响PD-L1的细胞定位
        2.5 HeLa细胞中Nur77和STAT1发生相互作用
        2.6 Nur77通过STAT1调控PD-L1
    3. IFN-γ诱导条件下Nur77对PD-L1的表达调控
    4. 配体诱导条件下Nur77对PD-L1表达的调控
第四章 讨论
第五章 结论与展望
    1. 结论
    2. 展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Identification of a novel splice variant of human PD-L1 mRNA encoding an isoform-lacking Igv-like domain[J]. Xian-hui HE~2 Li-hui XU Yi LIU~3 Key Laboratory of Ministry of Education for Tissue Transplantation and Immunology,Ji-nan University,Guangzhou 510632,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)



本文编号：3734452