小豆蔻明抑制mTOR抑制剂耐药肿瘤细胞增殖及其机制研究

发布时间：2023-03-11 20:29

　　目的1明确小豆蔻明(cardamonin,CAR)抑制mTOR抑制剂[雷帕霉素(Rapamycin,RAP)或(AZD8055,AZD)]耐药HeLa细胞及MCF-7细胞增殖的作用。2探讨CAR抑制RAP或AZD耐药细胞增殖的作用机制。方法1药物浓度递增法构建耐RAP或AZD的HeLa细胞和MCF-7细胞采用药物浓度递增法,在体外对HeLa及MCF-7细胞进行诱导筛选,构建RAP耐药细胞(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)或AZD耐药细胞(HeLa/AZD、MCF-7/AZD),经RAP与AZD细胞毒性试验及Western blot鉴定耐药程度。2有限稀释法获取单细胞源性子代细胞亚克隆3细胞培养在常规培养条件下(37℃、5%CO₂、10%胎牛血清、100μg·mL^-1链霉素及100 U·mL^-1青霉素),1640培养液培养HeLa系列细胞(HeLa、HeLa/RAP、HeLa/AZD),High-glucose DMEM培养液培养MCF-7系列细胞(MCF-7、MCF-7/RAP、MCF-7/AZD)。保持细胞单层贴...

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【学位级别】：硕士

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英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 构建RAP或AZD耐药的HeLa细胞和MCF-7细胞
        2.3 细胞形态观察
        2.4 细胞计数
        2.5 有限稀释法获取单克隆
        2.6 MTT法测定细胞增殖
        2.7 MTT法测定细胞生长曲线
        2.8 克隆及含药单克隆形成实验测定细胞增殖
        2.9 细胞迁移实验
        2.10 Western blot检测蛋白表达
        2.11 统计学分析
结果
    1 成功构建RAP或AZD耐药的HeLa细胞和MCF-7细胞
        1.1 RAP或AZD耐药的HeLa细胞(HeLa/RAP、HeLa/AZD)
        1.2 RAP或AZD耐药的MCF-7细胞(MCF-7/RAP、MCF-7/AZD)
    2 CAR抑制RAP或AZD耐药细胞增殖的作用
        2.1 CAR抑制耐药细胞的增殖
        2.2 CAR抑制耐药细胞的克隆形成
    3 CAR抑制RAP或AZD耐药细胞迁移及β-catenin蛋白表达的作用
    4 CAR抑制RAP或AZD耐药细胞的mTOR信号通路活性
    5 CAR抑制RAP或AZD耐药细胞ABC跨膜转运蛋白MDR1表达
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3760187