特定化合物库中呼吸道合胞病毒新型抑制剂的筛选
发布时间：2023-04-02 10:52
人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起全球小于一岁婴幼儿急性下呼吸道感染最主要的病原体,同时RSV还可以感染器官移植以后的病人、免疫缺陷人群以及老年人,致死率极高。RSV是1956年在一只黑猩猩的鼻炎分泌液中首次发现的,一年后在患有呼吸道疾病感染的婴儿体内分离出同样的病毒。因该病毒可致使感染的细胞产生特殊的细胞间融合现象,故称之为“呼吸道合胞病毒”。RSV每年感染3千万左右的婴幼儿,其中对发展中国家的影响最大。在全世界范围内,迄今无疫苗或有效的药物来治疗其感染。因此急需研发有效的抗病毒药物和疫苗。环靶明(Cyclopamine,CPM)是一种异甾体类生物碱,对多种肿瘤都有良好的抑制作用。我们课题组前期的研究发现环靶明能够有效抑制呼吸道合胞病毒的复制,但其可影响Hedgehog信号通路的正常活性,具有致畸作用,这一特性妨碍了将其开发为治疗病毒感染的儿科用药。基于之前的研究,我们课题组在CPM结构的基础上进行了一系列的修饰,设计了 14种类似物,根据修饰位置和基团的不同分为4个系列,S1-1,S1-2,S1-3,S1-4为第一...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论
1.1 呼吸道合胞病毒的生物学性质
1.1.1 呼吸道合胞病毒的分类
1.1.2 呼吸道合胞病毒形态的多样性
1.1.3 呼吸道合胞病毒基因组结构及其功能作用
1.1.4 呼吸道合胞病毒的生活史
1.2 呼吸道合胞病毒的传播途径及流行情况
1.2.1 呼吸道合胞病毒的传播
1.2.2 呼吸道合胞病毒的流行情况
1.2.3 婴幼儿感染呼吸道合胞病毒的临床症状
1.3 人呼吸道合胞病毒的药物及疫苗研究进展
1.3.1 人呼吸道合胞病毒药物的研究进展
1.3.2 人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展
1.4 本研究的内容和意义
第二章 快速抗RSV药物筛选方法的建立及CPM类似物抑制RSV复制能力的鉴定
研究背景
2.1 实验材料
2.1.1 化合物
2.1.2 细胞和病毒株
2.1.3 试剂耗材
2.1.4 主要仪器
2.1.5 常用溶液
2.2 实验方法
2.2.1 HEp-2细胞的复苏及传代
2.2.2 HEp-2细胞的冻存
2.2.3 RSV-Luc毒株的扩繁
2.2.4 RSV-Luc毒株滴度的测定
2.2.5 重组病毒RSV-Luc感染细胞荧光素酶活性与病毒滴度相关性分析
2.2.6 RSV-Luc基于细胞水平药筛模型的建立
2.2.7 类似物的获得
2.2.8 CPM及其类似物细胞活力检测
2.2.9 CPM及其类似物抑制RSV-Luc复制能力的鉴定
2.2.10 数据分析
2.3 实验结果
2.3.1 免疫细胞化学染色法检测RSV-Luc毒株的滴度
2.3.2 重组病毒RSV-Luc感染细胞荧光素酶活性与病毒滴度相关性分析
2.3.3 CPM抗病毒功能的浓度依赖性
2.3.4 CPM及其类似物细胞活力检测
2.3.5 类似物抑制RSV-Luc复制能力的鉴定
2.4 总结
第三章 Smo介导的Hedgehog信号通路活性检测方法建立及CPM类似物干预Smo功能的分析
研宄背景
3.1 实验材料
3.1.1 化合物
3.1.2 细胞系
3.2 实验方法
3.2.1 基于双报告基因检测系统检测Smo介导转录事件水平的分析模型
3.2.2 Smo介导转录事件的人为调控
3.2.3 CPM及类似物对Smo介导转录事件的干预程度分析
3.2.4 数据分析
3.3 实验结果
3.3.1 两种激活剂的比较
3.3.2 两种激活剂激活的基础上两种抑制剂抑制水平的比较
3.3.3 六种化合物对Hedgehog信号通路干扰水平IC50的分析
3.4 总结
第四章 CPM和最佳类似物作用靶点分析
研宄背景
4.1 实验材料
4.1.1 化合物
4.1.2 细胞系及质粒
4.2 实验方法
4.2.1 化合物功能的评估方法
4.2.2 质粒的抽提
4.2.3 微基因组技术检测CPM和最佳类似物作用靶点
4.3 实验结果
4.3.1 化合物的综合评估
4.3.2 CPM及S2-5作用靶点分析
4.4 总结
第五章 讨论与展望
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3779097
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论
1.1 呼吸道合胞病毒的生物学性质
1.1.1 呼吸道合胞病毒的分类
1.1.2 呼吸道合胞病毒形态的多样性
1.1.3 呼吸道合胞病毒基因组结构及其功能作用
1.1.4 呼吸道合胞病毒的生活史
1.2 呼吸道合胞病毒的传播途径及流行情况
1.2.1 呼吸道合胞病毒的传播
1.2.2 呼吸道合胞病毒的流行情况
1.2.3 婴幼儿感染呼吸道合胞病毒的临床症状
1.3 人呼吸道合胞病毒的药物及疫苗研究进展
1.3.1 人呼吸道合胞病毒药物的研究进展
1.3.2 人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展
1.4 本研究的内容和意义
第二章 快速抗RSV药物筛选方法的建立及CPM类似物抑制RSV复制能力的鉴定
研究背景
2.1 实验材料
2.1.1 化合物
2.1.2 细胞和病毒株
2.1.3 试剂耗材
2.1.4 主要仪器
2.1.5 常用溶液
2.2 实验方法
2.2.1 HEp-2细胞的复苏及传代
2.2.2 HEp-2细胞的冻存
2.2.3 RSV-Luc毒株的扩繁
2.2.4 RSV-Luc毒株滴度的测定
2.2.5 重组病毒RSV-Luc感染细胞荧光素酶活性与病毒滴度相关性分析
2.2.6 RSV-Luc基于细胞水平药筛模型的建立
2.2.7 类似物的获得
2.2.8 CPM及其类似物细胞活力检测
2.2.9 CPM及其类似物抑制RSV-Luc复制能力的鉴定
2.2.10 数据分析
2.3 实验结果
2.3.1 免疫细胞化学染色法检测RSV-Luc毒株的滴度
2.3.2 重组病毒RSV-Luc感染细胞荧光素酶活性与病毒滴度相关性分析
2.3.3 CPM抗病毒功能的浓度依赖性
2.3.4 CPM及其类似物细胞活力检测
2.3.5 类似物抑制RSV-Luc复制能力的鉴定
2.4 总结
第三章 Smo介导的Hedgehog信号通路活性检测方法建立及CPM类似物干预Smo功能的分析
研宄背景
3.1 实验材料
3.1.1 化合物
3.1.2 细胞系
3.2 实验方法
3.2.1 基于双报告基因检测系统检测Smo介导转录事件水平的分析模型
3.2.2 Smo介导转录事件的人为调控
3.2.3 CPM及类似物对Smo介导转录事件的干预程度分析
3.2.4 数据分析
3.3 实验结果
3.3.1 两种激活剂的比较
3.3.2 两种激活剂激活的基础上两种抑制剂抑制水平的比较
3.3.3 六种化合物对Hedgehog信号通路干扰水平IC50的分析
3.4 总结
第四章 CPM和最佳类似物作用靶点分析
研宄背景
4.1 实验材料
4.1.1 化合物
4.1.2 细胞系及质粒
4.2 实验方法
4.2.1 化合物功能的评估方法
4.2.2 质粒的抽提
4.2.3 微基因组技术检测CPM和最佳类似物作用靶点
4.3 实验结果
4.3.1 化合物的综合评估
4.3.2 CPM及S2-5作用靶点分析
4.4 总结
第五章 讨论与展望
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3779097
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3779097.html
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