JQ1增敏阿霉素诱导细胞凋亡机理研究

发布时间：2023-04-03 01:26

　　RNA聚合酶Ⅱ在启动子附近的转录暂停与释放,是真核生物调控基因转录,快速响应刺激的一种手段。我们实验室研究发现,BRD4参与这个过程。JQ1是一种抑制BRD4的小分子抑制剂,目前还未用于临床。阿霉素(doxorubicin)是一种化疗药物,能够用于治疗多种实体瘤和血液肿瘤,它的副作用主要是会产生心肌毒性。在本实验室的前期研究中,我们发现阿霉素能够活化BRD4,我们认为这是细胞应对阿霉素损伤的一种自我保护机制。由此我们推测:抑制BRD4的活化会增加阿霉素诱导的细胞凋亡。本文以JQ1作为抑制BRD4的主要手段,以人结肠癌细胞HCT116、人非小细胞肺癌细胞A549和人黑色素瘤细胞M14为实验模型,运用流式细胞术、蛋白质免疫印迹分析、实时定量PCR、染色质免疫共沉淀等实验技术,探究JQ1能否增敏阿霉素诱导细胞凋亡的问题。经过实验,我们发现JQ1能够增敏阿霉素诱导HCT116等多种实体瘤细胞的凋亡,且增敏效果显著。接着,我们又对JQ1增敏阿霉素诱导细胞凋亡的机理进行研究。实验结果显示JQ1增敏阿霉素诱导细胞凋亡是通过调控抗凋亡和促凋亡基因的表达来实现的,并且这个过程依赖于P53。阿霉素通过活化...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 RNA聚合酶Ⅱ在启动子附近的暂停与释放
        1.1.1 RNA聚合酶Ⅱ调控的基因转录
        1.1.2 RNA聚合酶Ⅱ在启动子附近暂停的现象
        1.1.3 RNA聚合酶Ⅱ在启动子附近暂停与释放的机制
    1.2 BRD4及其小分子抑制剂JQ1
        1.2.1 BET家族蛋白
        1.2.2 BRD4的结构
        1.2.3 BRD4的功能
        1.2.4 BRD4——新的癌症治疗靶标
        1.2.5 BRD4的小分子抑制剂JQ1
    1.3 化疗药物阿霉素
        1.3.1 阿霉素的结构与作用机理
        1.3.2 阿霉素的心肌毒性
    1.4 细胞凋亡与P53
        1.4.1 细胞凋亡
        1.4.2 肿瘤抑制因子P53
        1.4.3 P53参与的细胞凋亡
    1.5 本课题研究的内容和意义
        1.5.1 研究内容
        1.5.2 研究意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株、菌株和质粒
        2.1.2 实验试剂和材料
        2.1.3 实验仪器和耗材
    2.2 常用试剂配方
        2.2.1 基因克隆相关试剂
        2.2.2 细胞实验相关试剂
        2.2.3 蛋白免疫印迹试验相关试剂
        2.2.4 染色质免疫共沉淀相关试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 DH5α和Turbo感受态细胞的制备
        2.3.2 质粒转化
        2.3.3 质粒小量提取
        2.3.4 质粒中量提取
        2.3.5 DNA酶切
        2.3.6 琼脂糖凝胶电泳
        2.3.7 玻璃奶法胶回收DNA片段
        2.3.8 酚氯仿法提取DNA
        2.3.9 DNA连接
        2.3.10 聚合酶链式反应
        2.3.11 特异性pLV-shRNA的构建
        2.3.12 细胞培养
        2.3.13 细胞瞬时转染
        2.3.14 慢病毒包装感染
        2.3.15 细胞的药物处理
        2.3.16 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        2.3.17 蛋白免疫印迹试验
        2.3.18 RNA提取
        2.3.19 逆转录PCR
        2.3.20 即时定量PCR
        2.3.21 Annexin V法检测细胞凋亡
        2.3.22 染色质免疫共沉淀
第三章 结果与讨论
    3.1 敲低BRD4会增强DOX诱导的细胞凋亡
    3.2 JQ1可以增敏DOX诱导细胞凋亡
    3.3 JQ1增敏DOX诱导细胞凋亡依赖于P53
    3.4 JQ1抑制BCL2/-XL表达&DOX促进PUMA表达
    3.5 JQ1抑制BRD4和P-TEFb在BCL-XL启动子区的募集
    3.6 讨论与展望
参考文献
致谢



本文编号：3780369