靶向CD30抗体偶联药物的制备及其抗淋巴瘤活性研究

发布时间：2023-04-10 05:56

　　第一部分抗CD30抗体与力达霉素偶联药物的制备和抗淋巴瘤活性研究研究目的:抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADC)的发展和临床应用改变了血液恶性肿瘤的治疗模式。CD30是肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRS)成员,属于I型跨膜糖蛋白,其特异性地高表达于霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphomas,HLs)和间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphomas,ALCLs),可作为抗体偶联药物的理想靶点。力达霉素(lidamycin,LDM)是我所自主研发的烯二炔类高效抗肿瘤抗生素,由活性烯二炔发色团AE和辅基蛋白LDP组成,二者可在体外进行拆分和组装,LDP可通过基因工程技术与抗体偶联。因此,LDM是理想的ADC“弹头”药物。本研究以LDM为“弹头”药物,通过基因工程和体外组装相结合的“两步法”构建靶向CD30的新型ADC,并研究其对HLs和ALCLs的抗肿瘤活性。研究方法:通过基因工程技术将LDP偶联到抗CD30抗体的轻链N端,构建融合...

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 靶向CD30抗体与力达霉素偶联药物的制备和抗淋巴瘤作用研究
    前言
    1. 实验材料
        1.1 菌株
        1.2 质粒
        1.3 细胞株及培养
        1.4 实验动物
        1.5 主要试剂与耗材
        1.6 主要设备
        1.7 主要试剂配制
    2. 实验方法
        2.1 分子生物学实验方法
        2.2 CD30抗体anti-CD30及其融合蛋白anti-CD30-LDP表达载体的构建
        2.3 表达载体转染哺乳动物细胞CHO/dhFr-

        2.4 融合蛋白anti-CD30-IgG和anti-CD30-LDP的分离纯化
        2.5 细胞的培养
        2.6 融合蛋白对肿瘤细胞的体外活性分析
        2.7 活体成像法检测融合蛋白体内靶向性
        2.8 抗体偶联药物(ADC) anti-CD30-LDM的制备
        2.9 ADC药物anti-CD30-LDM体外活性分析
        2.10 Anti-CD30-LDM体内抗肿瘤活性评价
        2.11 统计学方法
    3. 实验结果
        3.1 重组表达质粒的构建
        3.2 表达载体转染CHO细胞及阳性克隆筛选
        3.3 CHO细胞的单克隆筛选
        3.4 融合蛋白的纯化和鉴定
        3.5 融合蛋白体外生物学活性分析
        3.6 小动物活体成像观察anti-CD30-LDP在体内的肿瘤靶向能力
        3.7 融合蛋白anti-CD30-LDP与力达霉素发色团AE的组装
        3.8 Anti-CD30-LDM对肿瘤细胞的增殖抑制或杀伤作用
        3.9 Anti-CD30-LDM对肿瘤细胞周期的影响
        3.10 Anti-CD30-LDM对肿瘤细胞凋亡过程的影响
        3.11 Anti-CD30-LDM对Karpas299移植瘤模型的生长抑制作用
    4. 讨论
    5. 参考文献
第二部分 Anti-CD30-LDM联合克唑替尼对间变性大细胞淋巴瘤的治疗作用
    前言
    1. 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 试剂、耗材及设备
    2. 实验方法
        2.1 药物联合作用评价
    3. 实验结果
        3.1 Crizotinib对肿瘤细胞的增殖抑制作用
        3.2 Anti-CD30-LDM与crizotinib联合对不同细胞的增殖抑制作用
        3.3 Anti-CD30-LDM与crizotinib联合对细胞凋亡的诱导作用
        3.4 Anti-CD30-LDM和crizotinib联合诱导细胞凋亡的机制
        3.5 Anti-CD30-LDM和crizotinib联合作用的体内抗肿瘤活性评价
    4. 讨论
    5. 参考文献
结论
创新点
综述
附录
    博士期间科研成果
    缩略语表
致谢



本文编号：3788453

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