新型NEK2抑制剂MBM-17和MBM-55的抗肿瘤作用及NEK2调节KDM5B/H3K4me3的分子机制研究

发布时间：2023-05-28 07:25

　　背景:NEK2,细胞周期调控蛋白相关的丝/苏氨酸激酶家族成员之一,参与细胞有丝分裂的进程,具有组装中心体,调控中心体分离,促进染色体凝缩和染色体分离等生物学功能。NEK2在多种肿瘤中过表达,功能异常的NEK2能诱导肿瘤的发生和耐药,而且NEK2的上调还能促进肿瘤恶性程度的转变,同时还与肿瘤的不良预后相关。因此,NEK2这一原癌基因可以作为一个新型的药物靶向分子,具有巨大的抗肿瘤治疗潜力。目的:迄今为止,针对NEK2的抑制剂仍然存在着生物活性低、选择性差、体内抗肿瘤效果不好等问题。虽然已经发现了很多新的NEK2上游信号分子和其下游作用靶点,但其相关信号通路尚不是很明确。因此,针对以上两个问题,本课题旨在通过对一系列阻断ATP与NEK2结合位点化合物的筛选,筛选出具有高选择性和高肿瘤抑制活性的NEK2激酶抑制剂,并在体外分子、细胞和体内动物水平对化合物进行整体评价;同时对NEK2的相关分子作用机制进行更加深入的探究。方法:(1)采用Mobility shift法对MBM-55进行酶谱选择性筛选;(2)MTT法检测MBM-17和MBM-55对多种肿瘤细胞的增殖抑制活性;(3)免疫印迹法检测M...

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 前言
    1. NEK2激酶的研究介绍
        1.1 NEK2激酶的结构及表达特点
        1.2 NEK2的生物学功能
        1.3 NEK2与肿瘤
            1.3.1 NEK2过表达诱导肿瘤的发生
            1.3.2 NEK2与耐药相关
            1.3.3 NEK2与肿瘤进程和不良预后相关
        1.4 NEK2相关信号通路
            1.4.1 NEK2的主要上游调控因子
            1.4.2 NEK2的主要下游效应分子
        1.5 靶向NEK2的治疗
            1.5.1 RNA干扰
            1.5.2 阻断ATP结合位点
            1.5.3 干扰蛋白-蛋白相互作用
    2. KDM5B的研究介绍
        2.1 KDM5B的结构
        2.2 KDM5B与H3K4me3的联系及其生物学功能
        2.3 KDM5B与人类肿瘤之间的联系
        2.4 靶向KDM5B的肿瘤治疗
    3. 研究目的
    4. 研究内容
第二章 新型NEK2抑制剂MBM-17和MBM-55的体外抗肿瘤活性研究
    1. 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验耗材
        1.3 实验仪器
        1.4 化合物
    2. 实验方法
        2.1 Mobility shift法检测酶谱选择性
        2.2 细胞培养
        2.3 体外细胞生长活性检测
        2.4 免疫印迹法(Western Blot)
        2.5 细胞周期检测
        2.6 细胞凋亡检测
        2.7 数据处理
    3. 实验结果
>        3.1 MBM-17和MBM-55对NEK2激酶活性的抑制活性及酶谱选择性_</li>
        3.2 MBM-17和MBM-55对多种肿瘤细胞株均有较好的增殖抑制作用
        3.3 MBM-17和MBM-55能够使细胞内的NEK2蛋白降低
        3.4 MBM-17和MBM-55能够将细胞阻滞在G2/M期
        3.5 MBM-17和MBM-55具有诱导细胞凋亡的作用
    4. 讨论
第三章 新型NEK2抑制剂MBM-17和MBM-55的体内抗肿瘤活性研究
    1. 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验耗材
        1.3 实验仪器
        1.4 化合物
        1.5 实验动物
    2. 实验方法
        2.1 MBM-17和MBM-55体内药代学实验
        2.2 体内抗肿瘤活性研究
            2.2.1 小鼠肿瘤细胞皮下接种
            2.2.2 小鼠分组及给药
            2.2.3 监测指标
        2.3 数据处理
    3. 实验结果
        3.1 MBM-17S和MBM-55S的体内药物代谢动力学研究
        3.2 MBM-17S和MBM-55S在HCT-116结肠癌异种移植瘤上的抗肿瘤活性
        3.3 MBM-17S和MBM-55S对HCT-116异种移植瘤模型的毒性探究
    4. 讨论
第四章 NEK2激酶调节KDM5B/H3K4me3的分子作用机制研究
    1. 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验耗材
        1.3 实验仪器
    2. 实验方法
        2.1 免疫印迹法(Western Blot)
        2.2 转染
        2.3 q-PCR(实时荧光定量PCR)实验
    3. 实验结果
        3.1 MBM-17和MBM-55使H3K4me3蛋白表达升高KDM5B蛋白表达降低
        3.2 MDA-MB-468细胞高表达NEK2和KDM5B
        3.3 NEK2沉默后使KDM5B蛋白表达降低
        3.4 NEK2沉默后不改变KDM5B的mRNA水平
    4. 讨论
第五章 总结
参考文献
附录
攻读硕士学位期间所发表文章
致谢



本文编号：3824206